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抗奶牛孕酮单克隆抗体的制备及酶联免疫检测方法的建立

作　者: 冯晓琼
导　师: 张乃生
学　校: 吉林大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 奶牛乳汁孕酮单克隆抗体
分类号: S854.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 173次
引　用: 2次
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内容摘要

奶牛、黄牛发情周期中由卵巢的黄体产生孕酮,分泌入血液、乳汁、唾液、尿液中,浓度在发情期最低,到发情中期因黄体成熟而达最高水平。本研究以甾体激素孕酮为研究对象,采用琥珀酸酐法活化11ɑ-羟孕酮,碳二亚胺法使其与载体蛋白发生偶联。经两次试验,成功地实现了孕酮此种小分子物质与大分子载体蛋白的偶联,完成了完全抗原(包括免疫抗原和检测抗原)的制备,并进行了免疫学方面的鉴定。按不同的免疫程序,将试验小鼠分组,用免疫抗原免疫小鼠,经效价测定后选择效价较高的一组融合用。运用经典的PEG融合法,经两次融合,共得到3株单抗,分别是1F6、2A11、2G6。其中1F6为IgG型,其余为IgM型。腹水经ELISA法测定效价达到1︰1×106;1︰1×105;1︰8×104。三株单抗的相对亲和力为:1F6>2G6>2A11,分别识别两个以上的抗原位点。针对单抗特异性强,亲和力高的特点,经酶标记的抗原、未经标记的抗原与单抗发生竞争性酶联免疫反应,用单抗检测抗原,并优化各项检测条件,绘制标准曲线,曲线的工作浓度范围为:0.5～100ng/ml。初步建立了孕酮含量的ELISA检测方法。

全文目录

内容提要  4-5
英文缩写词表  5-7
前言  7-9
第一篇文献综述  9-14
  第一章奶牛乳汁孕酮免疫检测方法的研究进展  9-14
第二篇研究内容  14-51
  第一章孕酮完全抗原的制备  14-23
    1 材料与方法  14-17
    2 结果  17-20
    3 讨论  20-22
    4 小结  22-23
  第二章孕酮单克隆抗体的制备及初步鉴定  23-41
    1 材料与方法  23-30
    2 结果  30-36
    3 讨论  36-40
    4 小结  40-41
  第三章孕酮ELISA检测方法的建立  41-51
    1 材料与方法  41-44
    2 结果  44-48
    3 讨论  48-50
    4 小结  50-51
结论  51-52
参考文献  52-57
中文摘要  57-59
英文摘要  59-61
致谢  61-62
导师简介  62-63
作者简介  63

抗奶牛孕酮单克隆抗体的制备及酶联免疫检测方法的建立

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