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丙型肝炎病毒融合抗原基因CE、NS3CE转基因番茄的培育

作　者: 李轶女
导　师: 沈桂芳
学　校: 中国农业科学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 丙型肝炎病毒融合抗原基因植物表达载体转基因番茄
分类号: S641.203.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
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内容摘要

丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）是危害人类健康最主要的传染源之一。与其它肝炎病毒感染的结果不同，HCV具有较高的慢性化感染比例，有时高达80％以上，因而具有更大的危害性。对于丙型肝炎迄今尚缺乏有效的治疗措施，因此研制安全、经济、有效和易于推广使用的抗病毒疫苗是预防和控制HCV的有效手段。本实验设计把丙型肝炎病毒中的C、E融合基因，NS3、C、E融合基因转化到人类可以直接食用，又非常喜爱的蔬菜--番茄中，得到表达。人们在食用转基因番茄的同时，便可获得口服免疫，从而达到预防和控制丙型肝炎病毒的效果。根据相关资料，选取丙型肝炎病毒基因中能够产生中和性抗体、具有很好免疫原性的NS3、CE基因，作为目的基因。设计两对引物，PCR扩增出这两段基因，在设计NS3 3’引物时设计上一段编码连接肽Ser-Pro-Gly-Ser的基因，使两段基因以连接肽相连，构成融合基因NS3CE。连接肽中Gly的柔软效应，Pro的转角效应更利于重组蛋白的抗原稳定性，并可提高重组蛋白的表达量。将CE、NS3CE基因分别连接到载体pBI121上，构建表达载体pBICE、pBINS3CE。通过农杆菌EHA105介导，转化番茄的子叶和下胚轴，诱导愈伤组织分化和幼苗形成，进而再生出完整植株。提取再生植株基因组DNA，通过PCR扩增以及基因组酶切Southern blotting等分子检测结果证明CE、NS3CE基因分别整合到转基因番茄的基因组DNA中。RT-PCR实验结果证明HCV CE、NS3CE基因也分别在转基因番茄的转录水平表达。直接食用转丙型肝炎病毒基因番茄进行口服免疫是一种新思路，有着良好的应用前景。本实验设计试图在前人的基础上，探索出一条生产丙型肝炎口服疫苗的可行的路子，为更好地预防和控制丙型肝炎，增进健康做一些基础性的有价值的工作。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
第一章文献综述  7-21
  第一节丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）的研究现状  7-14
    一、丙型肝炎发生的现状与危害  7-8
    二、丙型肝炎病毒的分子生物学  8-10
    三、丙型肝炎疫苗  10-13
    四、展望  13-14
  第二节转基因植物生产基因工程疫苗的研究  14-18
    一、转基因植物基因工程疫苗的生产方法  14-15
    二、转基因植物基因工程疫苗的优点与问题  15-16
    三、转基因植物基因工程疫苗的研制和应用  16-17
    四、展望  17-18
  第三节论文的设计思路及实验方案  18-21
    一、目的、意义及研究现状  18-19
    二、研究方案  19-20
    三、技术路线  20-21
第二章研究报告  21-56
  第一节丙型肝炎病毒融合抗原基因CE、NS3CE表达载体的构建及序列分析  21-39
    一、材料与方法  21-27
    二、结果与分析  27-38
    三、讨论  38-39
  第二节番茄的转化及转基因番茄的获得  39-56
    一、材料与方法  39-46
    二、结果与分析  46-55
    三、讨论  55-56
结论  56-57
参考文献  57-62

丙型肝炎病毒融合抗原基因CE、NS3CE转基因番茄的培育

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