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利用毒蛋白基因提高棉花转化效率的研究

作　者: 王辉
导　师: 祝建波
学　校: 石河子大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 农杆菌转化微注射法转化效率
分类号: S562
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

用转基因方法将外源目的基因导入棉花是棉花遗传改良的主要途径,但几种棉花转基因方法各有其局限性。本试验将农杆菌毒蛋白基因（VirD₁,VirD₂,VirE₂）,引入EMS,6BA,GA等辅助剂,通过花粉管通道法将GFP与三个毒蛋白基因一起田间导入棉花。利用三个毒蛋白基因在棉花授粉时候瞬时表达,并将GFP定位于棉花细胞核,达到提高外源基因的转化效率的目的。本试验利用农杆菌Ti质粒中三个毒蛋白基因（VirD₁、VirD₂和VirE₂）和EMS,LW77,6BA,GA等辅助剂,应用改进的微注射法将筛选GFP导入6个棉花品种,并通过卡那初筛、PCR方法验证和荧光鉴定,提高了棉花的转化效率。为了便于检测GFP的荧光,构建了不同细胞定位的植物表达载体pBLG-pR1aS-GFP,pblg-sm-gfp,pblg-pa7-gfp,pblg-gfp,通过农杆菌介导法转化烟草（NC89）,分别获得了转基因烟草,经鉴定定位于内质网pblg-pr1aS-gfp的转基因烟草,在荧光倒置显微镜下,通过蓝光激发下,GFP发出的荧光远远大于其它3个载体的转基因烟草。通过比较农杆菌直接注射法、农杆菌侵染花粉法、毒蛋白基因的协助转化法的研究表明:农杆菌直接注射法的转化率0.6-1.8℅,农杆菌侵染花粉法的转化率为0.5-1.8℅,毒蛋白基因的协助转化并且附加EMS,LW77,6BA,GA处理,可使棉花转化率达到2.3-2.8℅。本研究利用毒蛋白基因改进花粉管通道法,提供了一个新的棉花转基因方法,对转基因棉花的分子育种和转化机理有重要经济意义。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-9
绪论  9-10
第一部分文献综述  10-13
  第一章棉花基因工程与基因转化研究进展  10-12
  第二章绿色荧光蛋白  12-13
第二部分试验部分  13-36
  第一章绿色荧光蛋白的筛选  13-21
  第二章三种棉花转化方法的改进和转化效率的研究  21-34
    第一节棉花花粉管通道法  21-29
    第二节三种转化方法的转化效率的研究  29-34
  第三章结果与讨论  34-36
参考文献  36-39
致谢  39-40
作者简介  40-41
导师评语  41

利用毒蛋白基因提高棉花转化效率的研究

内容摘要

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