学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

百脉根LjCYC2基因对观赏向日葵的遗传转化研究

作　者: 闫硕
导　师: 王广东
学　校: 南京农业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 观赏向日葵 LjCYC2基因 丛生芽增殖 农杆菌 转化 花型
分类号: S681.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 28次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


本试验以豆科植物百脉根中所克隆的花对称性基因LjCYC2为目的基因,利用农杆菌介导法导入观赏向日葵中,建立适宜的转化体系,同时研究该基因在观赏向日葵中的表达特性,为研究LjCYC2基因对观赏向日葵花型的影响并创建观赏向日葵种质资源提供基础,结果如下：1.以观赏向日葵品种‘富阳’(金黄色)种子为材料,通过MS基本培养基添加植物生长调节剂处理,建立起了一套观赏向日葵无菌苗丛生芽快速增殖、生根和离体成花的体系,可为观赏向日葵遗传转化体系的建立及转基因向日葵的花型、花色和花香性状鉴定提供基础。结果表明：低浓度BA对其丛生芽增殖效果较好,丛生芽增殖最适培养基为MS+0.05mg/L BA；生根效果受营养水平影响较大,最适生根培养基为1/2MS；在试验浓度范围内,花芽分化会被GA3和PP333所抑制,低浓度BA可延缓花芽衰老促进开花,最适开花培养基为MS+0.05mg/L BA。2.以观赏向日葵品种‘富阳’(金黄色)的顶端分生组织为受体材料建立了农杆菌介导的遗传转化体系。研究表明农杆菌的最适培养条件为28℃,150rpm的恒温摇床上暗培养15-18h；最适潮霉素筛选浓度为10mg·L-1；最适头孢霉素抑菌浓度为500mg·L-1；适当时间超声波预处理可提高转化率,25kHz超声波预处理2min后农杆菌侵染5min抗性苗比率可达7%,而真空渗入预处理反而会影响到抗性苗的筛选。3.以LjCYC2 F 5’-GGACTAGTATGTTCCCTTTCAGCTCAAG-3’和LjCYC2 R 5’-GGACTAGTTGGACGTGGATTTGTGCAC-3’分别为正反引物,对筛选出的19株抗性苗经PCR检测,结果均显阳性,说明外源基因已导入观赏向日葵；株系16-19的RT-PCR结果未扩增出目的条带,说明可能出现了转录水平的基因沉默；株系10和14转基因向日葵的管状花退化,舌状花变方且出现缺口,与LjCYC2基因在百脉根中的功能相符。

全文目录


摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
缩略词表  9-10
前言  10-11
第一部分 文献综述  11-25
  1 向日葵组织培养和遗传转化研究进展  11-15
    1.1 向日葵组织培养研究进展  11-13
    1.2 向日葵遗传转化研究进展  13-15
  2 被子植物花对称性遗传控制基因的研究进展  15-23
    2.1 TCP结构域基因家族的发现  15-16
    2.2 模式植物金鱼草中花对称性的遗传控制  16-18
    2.3 柳穿鱼中花不对称性的遗传控制  18-19
    2.4 苦苣苔科植物中花不对称性的遗传控制  19-20
    2.5 豆科植物中花不对称性的遗传控制  20-21
    2.6 复杂花序中花不对称性的遗传控制  21-23
  3 本研究的选题依据及研究内容  23-25
    3.1 选题依据和研究内容  23-24
    3.2 技术路线  24-25
第二部分 试验研究  25-55
  第一章 观赏向日葵无菌苗增殖及离体成花  25-35
    1 材料与方法  26-27
      1.1 试验材料  26
      1.2 试验方法  26-27
        1.2.1 无菌苗的获得  26
        1.2.2 丛生芽增殖  26
        1.2.3 生根培养  26-27
        1.2.4 离体成花  27
    2 结果与分析  27-33
      2.1 不同培养基对观赏向日葵丛生芽增殖的影响  27-28
      2.2 不同培养基对观赏向日葵生根的影响  28-29
      2.3 不同培养基对观赏向日葵离体成花的影响  29-33
    3 讨论与结论  33-35
  第二章 农杆菌介导的观赏向日葵高效遗传转化体系建立  35-46
    1 材料与方法  36-38
      1.1 试验材料  36
      1.2 试验方法  36-38
        1.2.1 农杆菌生长曲线的绘制与侵染工程菌液的制备  36-37
        1.2.2 观赏向日葵无菌苗的获得  37
        1.2.3 潮霉素筛选浓度的确定  37
        1.2.4 头孢霉素抑菌浓度的确定  37
        1.2.5 超声波和真空渗入预处理对转化效率的影响  37-38
    2 结果与分析  38-43
      2.1 农杆菌生长曲线的绘制  38-39
      2.2 潮霉素筛选浓度的确定  39-40
      2.3 头孢霉素抑菌浓度的确定  40-41
        2.3.1 头孢霉素对生长势和生根率的影响  40
        2.3.2 不同浓度的头孢霉素对农杆菌抑制效果的影响  40-41
      2.4 超声波和真空渗入处理对向日葵遗传转化效率的影响  41-43
    3 讨论与结论  43-46
  第三章 转基因观赏向日葵的分子鉴定和花型性状分析  46-55
    1 材料与方法  46-50
      1.1 抗性向日葵植株的PCR检测  46-48
        1.1.1 质粒DNA的提取  46-47
        1.1.2 向日葵基因组DNA的提取  47-48
        1.1.3 PCR反应体系  48
      1.2 转基因向日葵的RT-PCR检测  48-50
        1.2.1 观赏向日葵的总RNA提取  48-49
        1.2.2 观赏向日葵RNA反转录  49
        1.2.3 观赏向日葵cDNA的PCR扩增  49-50
      1.3 转基因植物的花型性状观察  50
    2 结果与分析  50-52
      2.1 抗性向日葵植株的PCR检测  50
      2.2 转基因向日葵的RT-PCR检测  50-51
      2.3 转基因植株的花型性状观察  51-52
    3 讨论与结论  52-55
全文结论  55-57
参考文献  57-65
论文发表情况  65-67
致谢  67

相似论文

  1. 小学美术教学中联想思维的转化训练,G623.75
  2. 粤东农村地区初中数学学业不良生的现状与转化策略研究,G633.6
  3. 高中数学学困生的有效转化策略探究,G633.6
  4. 利用RNAi提高烟草对病毒的抗性及岷江百合遗传转化体系的初步构建,S435.72
  5. 虾池一株微藻对尿素和甲硫氨酸利用效率的研究,S968.22
  6. rd29A驱动RdreBlBI基因转化‘红颊’草莓的研究,S668.4
  7. 甜菊苷的定向转化及产物甜茶苷的分离纯化,S566.9
  8. 功能化纳米二氧化钛多孔材料的制备、表征及性能研究,TB383.1
  9. 一个油菜菌核病抗病相关基因的功能初步分析,S435.654
  10. 新疆紫草细胞的稀土生物学效应及遗传转化,S567.239
  11. 海藻糖改善枯草芽孢杆菌电转化方法的研究,Q78
  12. 基于遗传算法优化的BP网络对生物柴油制备工艺的优化,TE667
  13. 水稻纹枯病菌三磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及其遗传转化体系的构建,S435.111.42
  14. 大豆细菌性斑点病原物的分离鉴定及其两个Ⅲ型效应因子的克隆与功能研究,S435.651
  15. 新疆小麦1Dx5基因的分离克隆及表达载体构建,S512.1
  16. 农杆菌介导GmWRKY21基因转化大豆的研究,S565.1
  17. 小麦UDP-葡萄糖基转移酶基因Ta-UGT3的表达载体构建和转化小麦研究,S512.1
  18. 大豆GmFtsH基因的遗传转化及功能分析,S565.1
  19. 野生种马铃薯蛋白酶抑制剂基因CYS和API的克隆及SpCYS转化马铃薯和烟草的初步研究,S532
  20. 小麦遗传转化体系建立和优化及抗坏血酸过氧化物酶基因（Ta-APX）转化小麦研究,S512.1
  21. 蝴蝶兰花序分生组织基因LFY表达载体构建及对蝴蝶兰的遗传转化,S682.31

中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 观赏园艺（花卉和观赏树木） > 一、二年生花卉类 > 其他
© 2012 www.xueweilunwen.com