学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

光皮桦分子遗传连锁图谱的构建

作　者: 尤卫艳
导　师: 童再康；黄华宏
学　校: 浙江农林大学
专　业: 林木遗传育种
关键词: 光皮桦遗传图谱分子标记 SSR AFLP 桦木属
分类号: S792.159
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 27次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

光皮桦(Betula luminifera H.Wink.)属桦木科(Betulaceae)桦木属(Betula),为我国特有的优良用材树种。天然分布于秦岭、淮河流域以南地区,适应性强且用途广泛,是优良的实木家具、实木地板、人造板、建筑以及造纸用材,已经作为我国南方地区重要的珍贵用材树种推广造林。本文以光皮桦LA05-1(母本)和江西JX0401(父本)杂交F1代植株作为作图群体,利用扩增片段长度多态性(AFLP)和微卫星(SSR)标记构建光皮桦的分子遗传连锁图。主要结论如下:1.通过比较SDS法、常规CTAB法和CTAB﹢硅珠法,筛选出适合提取光皮桦DNA提取的方法,体系采用MseI-EcoRI酶切组合。同时,通过对比实验确定了光皮桦AFLP反应所需的最佳模板DNA用量、酶切时间和预扩增产物稀释倍数等,优化了相关AFLP反应体系,并利用作图群体的亲本对64对AFLP引物进行复筛,筛选出引物42对用于构建光皮桦AFLP分子遗传连锁图谱。2.采用单因素法分别对影响SSR-PCR反应的因素进行分析,并利用白桦SSR引物首次构建光皮桦SSR分子反应体系。PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后随机挑取其中3对引物扩增的多态性片段进行克隆测序,进一步检验引物的通用性,所得序列经比对后得到的Max ident值均在95%以上。体系建立后,从36对(欧洲白桦23对,日本白桦13对)SSR引物中共筛选条带清晰,有多态性的引物7对(欧洲白桦3对,日本白桦4对)用于图谱构建。3.光皮桦F1代群体的表型性状分离较大,中间型偏多,偏双亲的较少。叶片形态、生长性状、干形性状表现型分离均呈正态分布,表明他们均由微效多基因控制。另外,叶片形态、苗高、地径、叶间距和枝间距表现父本类型的较少于表现母本类型的。采用统计分析软件SPSS17.0对性状间相关关系进行分析结果表明,叶长与叶宽、叶柄长、叶间距均达到极显著相关;叶宽与叶柄长极显著相关,与叶间距显著相关,而与长宽比极显著的负相关;叶间距、苗高、叶宽和地径均显著的相关;苗高和地径呈极显著相关关系,相关性达0.849。4.用FsLinkageMap 2.0进行连锁分析,其中LA05-1(母本)的63个标记分别组成三联体及三联体以上的连锁群16个,总图距651.08cM,平均图距10.33cM,标记间最大距离为37.7cM,最小距离为1.5cM(零距离除外);JX0401(父本)中共有37个标记分别组成三联体及三联体以上的连锁群8个,总图距547.48cM,平均图距14.80cM,标记间最大距离为36.8cM,最小距离为2.9cM(零距离除外);来自母本的7个SSR标记中有2个标记分别加到光皮桦LA05-1(母本)AFLP分子遗传图谱的第20号二连体上,另外一个和一个AFLP分子标记构成一个二连体。标记加上后,三联体以上的连锁群有17个,新增图谱长度36.5cM。而父本6个标记不能加在图谱上。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
前言  11-12
第一章文献综述  12-20
  1.1 光皮桦的研究进展  12-13
  1.2 林木遗传图谱研究进展  13-20
    1.2.1 构建植物遗传连锁图谱的遗传标记  13-15
      1.2.1.1 形态学标记  13
      1.2.1.2 细胞学标记  13-14
      1.2.1.3 生物化学标记  14
      1.2.1.4 分子标记  14-15
    1.2.2 作图群体  15-16
      1.2.2.1 F_2 分离群体  15
      1.2.2.2 F_1 群体  15-16
      1.2.2.3 单倍体胚乳作图群体  16
      1.2.2.4 BC 分离群体  16
      1.2.2.5 DH 分离群体  16
    1.2.3 林木遗传图谱作图策略  16
    1.2.4 国内外林木遗传连锁图谱的研究现状  16-18
    1.2.5 林木遗传图谱应用  18
      1.2.5.1 数量性状定位QTL  18
      1.2.5.2 分子标记辅助选择育种MAS  18
    1.2.6 林木遗传作图存在的问题  18-19
    1.2.7 目的和意义  19
    1.2.8 技术路线  19-20
第二章光皮桦AFLP 分子标记体系的建立  20-27
  2.1 材料与方法  20-21
    2.1.1 材料  20
      2.1.1.1 实验材料  20
      2.1.1.2 试剂  20
      2.1.1.3 仪器  20
    2.1.2 方法  20-21
      2.1.2.1 模板DNA 的制备与检测  20
      2.1.2.2 DNA 的酶切与连接  20-21
      2.1.2.3 预扩增反应  21
      2.1.2.4 选择性扩增  21
      2.1.2.5 PAGE 电泳及银染检测  21
  2.2 结果与分析  21-25
    2.2.1 基因组DNA 提取结果与检测  21-23
    2.2.2 不同浓度DNA 对选择性扩增结果的影响  23
    2.2.3 酶切时间对DNA 的影响  23-24
    2.2.4 不同稀释倍数预扩增产物对选择性扩增的影响  24
    2.2.5 引物组合的筛选  24-25
  2.3 结论与讨论  25-27
第三章光皮桦SSR 分子标记体系的建立  27-35
  3.1 材料与方法  27-30
    3.1.1 材料  27
    3.1.2 方法  27-30
      3.1.2.1 光皮桦DNA 的提取和检测  27
      3.1.2.2 PCR 扩增及其产物检测  27
      3.1.2.3 PCR 反应因素水平的确定  27-28
      3.1.2.4 引物合成  28
      3.1.2.5 电泳检测  28
      3.1.2.6 引物通用性研究  28
      3.1.2.7 引物初筛  28-30
  3.2 结果和分析  30-34
    3.2.1 不同DNA 用量对SSR 反应结果的影响  30
    3.2.2 不同dNTPs 浓度对结果的影响  30-31
    3.2.3 不同M92+浓度对结果的影响  31
    3.2.4 不同引物浓度对结果的影响  31-32
    3.2.5 不同酶用量对结果的影响  32
    3.2.6 退火温度的影响  32
    3.2.7 引物通用性检验  32-33
    3.2.8 引物筛选  33-34
  3.3 结论与讨论  34-35
第四章光皮桦作图群体的构建及表型变异分析  35-41
  4.1 材料和方法  35-37
    4.1.1 材料  35-36
    4.1.2 方法  36-37
      4.1.2.1 F_1 代群体的获得  36
      4.1.2.2 数据测量和整理  36-37
  4.2 结果与分析  37-40
    4.2.1 F_1 代群体苗期表型性状变异分析  37-39
      4.2.1.1 F_1 群体叶形表形变异分析  37
      4.2.1.2 F_1 群体干形变异分析  37
      4.2.1.3 F_1 群体生长性状变异分析  37-39
    4.2.2 F1 群体性状相关性分析  39-40
  4.3 结论与讨论  40-41
第五章光皮桦分子遗传图谱的构建  41-54
  5.1 光皮桦AFLP 分子遗传图谱的构建  41-48
    5.1.1 材料与方法  41-42
      5.1.1.1 作图群体  41
      5.1.1.2 仪器与试剂  41
      5.1.1.3 试验方法  41-42
      5.1.1.4 数据收集、整理和卡方检验  42
      5.1.1.5 连锁分析与图谱构建  42
    5.1.2 AFLP 数据分析  42-44
      5.1.2.1 AFLP 标记扩增的多态性分析  42
      5.1.2.2 AFLP 标记在F1 代群体中的分离方式  42-44
    5.1.3 光皮桦LA05-1（母本）分子遗传图谱的构建  44-47
    5.1.4 光皮桦JX0401（父本）分子遗传图谱的构建  47-48
  5.2 光皮桦SSR 分子标记对AFLP 分子遗传图谱上的加密  48-51
    5.2.1 SSR 分子标记体系的建立  48-49
    5.2.2 SSR 标记扩增的多态性分析  49-50
    5.2.3 SSR 标记在F1 代群体中的分离方式  50
    5.2.4 利用SSR 标记对已构建的AFLP 分子遗传图谱加密  50-51
  5.3 结论与讨论  51-54
    5.3.1 本章小结  51
    5.3.2 讨论  51-54
第六章结论与展望  54-56
参考文献  56-63
附录  63-64
个人简介  64-65
致谢  65

光皮桦分子遗传连锁图谱的构建

内容摘要

全文目录

相似论文