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清脑益智方对神经细胞缺氧及谷氨酸损伤保护作用的实验研究

作　者: 李苓
导　师: 张伯礼
学　校: 天津中医学院
专　业: 中医内科学
关键词: 中药血清脑缺血神经细胞白细胞介素-6 基因表达细胞凋亡牛磺酸
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

目的：探讨清脑益智方血清对脑缺血损伤后神经细胞的保护作用。方法：应用体外细胞培养技术，培养原代鼠胚脑神经细胞，根据缺血时脑损伤机理制成缺氧及谷氨酸损伤模型。应用细胞凋亡原位检测技术（即TUNEL法）观察中药清脑益智方血清在谷氨酸损伤条件下对细胞凋亡的影响。应用逆转录-多聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测缺氧及谷氨酸损伤后脑神经细胞白介素-6（IL-6）在中药血清作用下的基因表达的变化。并与已知具有神经保护作用的牛磺酸进行比较研究。结果经计算机图像处理软件进行分析。通过相差显微镜及扫描电镜对细胞超微结构进行观察。结果：200μM谷氨酸与神经细胞共同培养10min可以代表谷氨酸的神经兴奋毒性。此方法诱导的细胞凋亡以再培养3-6小时为最显著。清脑益智方血清可显著降低由谷氨酸损伤所诱导的细胞凋亡率。谷氨酸损伤组为47.28％，中药组为24.76％（p＜0.05）。并能调节损伤情况下IL-6基因的表达，使之恢复到正常免疫水平。预防组效果优于治疗组。中药在这两方面作用皆优于牛磺酸。结论：对谷氨酸损伤模型致细胞凋亡的动态观察，提示缺血性卒中“治疗时间窗”即最佳时限应在6小时内。清脑益智方可通过对IL-6基因表达水平的调节，从而在免疫应答中保护脑神经细胞免受缺氧及谷氨酸损伤，抑制细胞凋亡，提高细胞存活率，起到保护脑神经细胞的作用。证明了预防性神经保护对阻断缺血性级联反应的摘翌重要作用。本研究为防治中风病的神经细胞损伤和血管性痴呆的发生、发展的机理研究提供了试验依据。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
前言  7-9
实验一、鼠胚大脑神经细胞体外培养  9-12
  前言  9
  材料与方法  9-10
  结果  10-11
  小结  11-12
实验二、清脑益智方鼠血清的制备  12-14
  前言  12
  材料与方法  12
  小结  12-14
实验三、鼠胚大脑神经细胞体外培养谷氨酸损伤模型的建立  14-18
  前言  14
  材料与方法  14
  结果  14-16
  小结  16-18
实验四、清脑益智方对鼠胚神经细胞凋亡的影响  18-24
  前言  18
  材料与方法  18-20
  结果  20-22
  小结  22-24
实验五、清脑益智方对鼠胚神经细胞IL-6基因表达的调节  24-30
  前言  24
  材料与方法  24-27
  结果  27-29
  小结  29-30
讨论  30-34
结语  34-35
综述  35-39
参考文献  39-44
致谢  44

清脑益智方对神经细胞缺氧及谷氨酸损伤保护作用的实验研究

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