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绵羊卵泡液蛋白的蛋白质组学分析

作　者: 徐铁山
导　师: 赵兴绪
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 动物医学工程
关键词: 双向电泳 卵泡液 血浆 卵母细胞 质谱 α-1抗胰蛋白酶 β-乳球蛋白 甲状腺素运载蛋白 蛋白质组学
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


本研究以双向电泳技术建立了绵羊卵泡液和血浆全蛋白以及不同发育时期的卵泡液蛋白质表达图谱。采用PDQuest8.0软件对凝胶图谱蛋白质的表达模式进行分析,并检测了蛋白质表达模式上的差异,进而将凝胶中差异表达的蛋白质斑点运用高效液相色谱串联离子阱质谱分析,数据库搜索后,获得了一些与卵泡发育有关的蛋白质。卵泡液是血浆组分跨过血卵泡屏障转移和颗粒细胞新陈代谢共同的产物,基于此,本研究通过对绵羊卵泡液和血浆差异蛋白质组学研究,以期找出卵泡液中特异表达的蛋白以及与卵母细胞发育有关的蛋白。通过研究发现了10个差异表达的蛋白点,但是通过质谱只检测出2种蛋白,即免疫球蛋白重链和α-1抗胰蛋白酶。免疫球蛋白重链在卵泡液中表达下调,而α-1抗胰蛋白酶表达上调。α-1抗胰蛋白酶是卵母细胞发育的抑制剂。卵泡液是卵母细胞生长和分化的重要基础。在卵母细胞成熟过程中,卵泡液构成了卵母细胞成熟的微环境,其中的一些组分可用做卵母细胞成熟及其品质的指标。本研究通过对绵羊不同发育阶段卵泡液蛋白质组学研究,在卵泡液中筛选卵母细胞成熟的生物标志。结果发现了10个差异表达的蛋白点,通过质谱检测出4个蛋白点。这4个蛋白点对应于3种蛋白质,分别为β-乳球蛋白、甲状腺素运载蛋白、免疫球蛋白λ链C区。其中β-乳球蛋白和甲状腺素运载蛋白在卵泡发育过程中表达上调,而免疫球蛋白λ链C区表达下调。β-乳球蛋白和甲状腺素运载蛋白都与维生素A的运输有关,维生素A在卵母细胞成熟过程中起重要作用。本研究初步筛选了与卵泡发育有关的蛋白质,探索了卵泡发育的分子机理,为研究卵泡发育的分子生物学及分子遗传学特性奠定了基础。

全文目录


摘要  2-3
Summary  3-7
缩略词对照表  7-8
第一章 文献综述  8-13
  1. 蛋白质组学概述  8-9
  2. 卵泡液蛋白质组学研究进展  9-12
    2.1 卵泡液与血浆的蛋白质分析概况  9-10
    2.2 寻找卵泡液中的新蛋白  10
    2.3 筛选与卵母细胞发育和成熟有关的生物标志  10-11
    2.4 筛选与疾病有关的生物标志  11-12
  3. 展望  12-13
第二章 绵羊卵泡液与血浆的差异蛋白质组学研究  13-34
  1 材料与方法  13-22
    1.1 主要试剂  13
    1.2 主要设备  13-14
    1.3 溶液配制  14-17
    1.4 实验方法  17-22
      1.4.1 样品采集及蛋白质样品制备  17
      1.4.2 双向凝胶电泳分离  17-20
      1.4.3 凝胶染色  20-21
      1.4.4 凝胶扫描及图像分析  21
      1.4.5 质谱检测  21-22
  2. 结果  22-29
    2.1 绵羊卵泡液样品的制备分析  22-23
      2.1.1 2-DE 图谱斑点数量  22
      2.1.2 2-DE 图谱蛋白质斑点的分布  22-23
    2.2 绵羊卵泡液和血浆全蛋白差异表达分析  23-24
    2.3 绵羊卵泡液和血浆差异蛋白的质谱鉴定  24-26
    2.4 数据库检索结果  26-29
  3. 讨论  29-34
    3.1 样品制备  29-32
    3.2 α-1 抗胰蛋白酶：卵母细胞发育的抑制因子  32
    3.3 卵泡液中特异表达的蛋白  32-34
第三章 不同发育阶段绵羊卵泡液差异蛋白质组学研究  34-42
  1 材料与方法  34-35
    1.1 实验材料  34
    1.2 卵泡液蛋白质样品制备  34
    1.3 双向电泳  34-35
      1.3.1 等电点聚焦  34-35
      1.3.2 SDS-PAGE 电泳  35
      1.3.3 凝胶染色、图像分析及质谱鉴定  35
  2. 结果  35-37
    2.1 不同发育时期卵泡液蛋白质组差异表达分析  35-36
    2.2 差异表达蛋白点的质谱鉴定  36-37
  3. 讨论  37-42
    3.1 甲状腺素运载蛋白：视黄醇运输的载体  37-38
    3.2 β-乳球蛋白：视黄醇运输的另一可能载体  38
    3.3 维生素A 及其代谢物在卵泡发育中的重要作用  38-39
    3.4 免疫球蛋白  39
    3.5 质谱检测结果不理想的原因分析  39-40
    3.6 运用蛋白质组学方法筛选出的与卵母细胞发育有关的蛋白  40-41
    3.7 要以组学的观点整体看待筛选出的蛋白  41-42
参考文献  42-49
结论  49-50
致谢  50-51
作者简介  51-52
导师简介  52-53

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 羊
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