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新城疫免疫程序的优化

作　者: 刘峰
导　师: 刘毅
学　校: 湖南农业大学
专　业: 兽医
关键词: RT-PCR 新城疫病毒强毒 免疫程序 鸡群免疫水平
分类号: S855.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


为了筛选出能抵抗新城疫(Newscastal disease, ND)强毒感染的肉鸡新城疫免疫程序,本文首先建立了直接利用新城疫强弱毒病毒本身的基因特性来检测新城疫(ND)强毒,根据国外已发表的应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增与新城疫病毒(NDV)毒力相关的编码融合蛋白(F)的基因片段的有关文献,我们在对该方法验证的基础上,对其在临诊上的应用条件进行了摸索,初步建立了可应用于临诊的检测NDV强毒的RT-PCR方法。本试验应用快速检测NDV强毒的RT-PCR方法对用弱毒疫苗免疫7天后的鸡群NDV强毒的感染进行监测。每7天采一批样品,共采三批样品,从每一批样品中都检测到NDV强毒株的存在,用检测NDV强毒的RT-PCR证实了按常用免疫程序免疫的鸡群仍能感染NDV强毒。然后本试验应用快速检测鸡NDV的RT-PCR方法对鸡新城疫四种不同免疫程序的鸡群NDV强毒的感染进行监测。检测结果显示,鸡新城疫弱毒疫苗和油乳剂灭活疫苗同时接种的免疫鸡群感染NDV强毒的感染率最低。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-11
第一章 文献综述  11-16
  1. 鸡新城疫概述  11-12
  2. 鸡新城疫的免疫程序  12-13
    2.1 用Ⅰ系苗进行免疫  12
    2.2 用Ⅱ系苗进行免疫  12
    2.3 用Ⅰ系苗和Ⅱ系苗进行混合免疫  12-13
  3. 鸡新城疫的诊断  13-16
    3.1 ND微生物学诊断方法  14
    3.2 ND清学诊断方法  14-15
    3.3 ND分子生物学诊断方法  15-16
第二章 检测新城疫强毒RT-PCR方法的验证和优化  16-32
  1. 材料  16-17
    1.1 病毒和细胞  16-17
    1.2 生化试剂  17
    1.3 RT-PCR引物  17
    1.4 泄殖腔棉拭样品  17
    1.5 其他试剂  17
  2. 方法  17-20
    2.1 引物设计  17
    2.2 引物验证及区分NDV强弱毒RT-PCR方法的建立  17-19
      2.2.1 用标准强毒对PCR引物进行验证  17-18
      2.2.2 用中毒Ⅰ系对PCR引物进行验证  18-19
      2.2.3 用标准弱毒对PCR引物进行验证  19
    2.3 用RT—PCR对Ⅰ系毒的纯化克隆进行检测  19
      2.3.1 用蚀斑克隆法纯化工系疫苗毒  19
      2.3.2 用RT—PCR方法检测细胞培养液  19
    2.4 引物对的特异性检验  19
    2.5 对鸡胚分离毒的尿囊液样品进行检测  19
    2.6 直接对泄殖腔样品进行RT-PCR方法检测  19-20
  3. 结论与分析  20-29
    3.1 设计并合成了下列四条引物  20
    3.2 验证引物对的结果  20-22
      3.2.1 标准强毒株的RT—PCR结果  20-21
      3.2.2 中毒工系的RT—PCR结果  21
      3.2.3 标准弱毒株Lasota(Ⅳ系)的RT-PCR结果  21-22
    3.3 中毒工系克隆毒的克隆RT—PCR结果  22-24
      3.3.1 工系克隆毒蚀斑的结果  22-23
      3.3.2 工系克隆毒的RT—PCR结果  23-24
    3.4 特异性试验结果  24-26
      3.4.1 引物对NDV1+NDV2的特异性试验结果  24
      3.4.2 引物对NDV1+NDV3的特异性试验结果  24-25
      3.4.3 引物对NDV1+NDV4的特异性试验结果  25-26
    3.5 鸡胚分离毒的尿囊液样品的RT—PCR结果  26-27
    3.6 泄殖腔样品直接进行RT—PCR结果  27-28
    3.7 阴性样品的RT—PCR结果  28-29
  4. 讨论  29-32
第三章 应用RT-PCR快速检测NDV强毒方法调查鸡群NDV抗体与ND强毒感染的关系  32-39
  1. 材料  32
    1.1 病毒和检测样品  32
    1.2 生化试剂  32
    1.3 RT—PCR引物  32
    1.4 ND血清抗体检测试剂盒  32
    1.5 本试验相关的其他药品、试剂  32
  2. 方法  32-34
    2.1 泄殖腔样品的RT-PCR检测  32-33
    2.2 用检测NDV强毒RT-PCR检测样品  33-34
      2.2.1 病料中病毒总RNA的提取  33
      2.2.2 将反转录成CDNA  33
      2.2.3 PCR扩增病毒核酸  33-34
      2.2.4 PCR产物电泳  34
    2.3 应用检测NDV强毒RT-PCR方法检测阳性、阴性和空白对照  34
    2.4 应用试剂盒检测NDV血清抗体效价  34
  3. 结果与分析  34-37
    3.1 应用检测NDV强毒方法检测NDV强毒AG68的RT-PCR结果  34-35
    3.2 应用检测NDV弱毒方法检测NDV弱毒C30的RT-PCR结果  35-36
    3.3 应用检测NDV弱毒方法检测生理盐水的RT-PCR结果  36
    3.4 30份样品的RT-PCR结果统计  36-37
    3.5 30份样品的RT-PCR详细结果及对应的抗体ELISA检测结果  37
  4. 讨论  37-39
第四章 应用检测NDV强毒RT-PCR方法筛选ND疫免疫程序试验  39-44
  1. 材料  39-40
    1.1 病毒和动物  39
    1.2 生化试剂  39
    1.3 RT-PCR引物  39
    1.4 疫苗  39-40
  2. 方法  40-42
    2.1 分组免疫及采样  40
    2.2 检测NDV强毒RT-PCR方法检测ND免疫鸡泄殖腔样品  40-42
      2.2.1 泄殖腔样品处理  40
      2.2.2 用检测NDV强毒RT-PCR检测样品  40-41
      2.2.3 应用检测NDV强毒RT-PCR方法检测阳性、阴性和空白对照  41-42
  3. 结果  42
    3.1 应用检测NDV强毒RT-PCR方法检测阳性、阴性和空白对照结果  42
    3.2 检测NDV强毒RT-PCR方法监测结果  42
  4. 讨论与分析  42-44
第五章 结论  44-45
参考文献  45-50
致谢  50-51
个人简介  51

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医传染病学 > 病毒病
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