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小麦近缘种EST-PCR分子标记的开发研究

作　者: 王美蛟
导　师: 原亚萍；林志珊
学　校: 吉林大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 远缘杂交小麦中间偃麦草大麦 EST EST-PCR标记 Intron-Flanking
分类号: S512.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 95次
引　用: 1次
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内容摘要

为了检测追踪通过远缘杂交导入小麦背景的外源染色体,使用含外源染色体的附加/代换系及其亲本材料,基于小麦第二群已定位EST,采用Intron-Flanking思想设计候选标记引物,配合“三级分离系统”分离扩增产物,分别开发了两套外源染色体特异的EST-PCR功能标记。其中中间偃麦草抗黄矮病染色体2Ai-2特异标记15个,这些标记均匀分布于2B染色体8个bin内并被进一步定位到了外源染色体长/短臂上;大麦抗穗发芽2H染色体特异标记30个,尽管因缺少端体材料无法进一步定位到长/短臂,但是在2B染色体上标记密度较高,标记特异性较好。标记开发结果表明,利用小麦已定位EST开发小麦近缘种特异的EST-PCR标记是可行的。

全文目录

内容提要  4-8
第一章：绪论  8-16
  1. 小麦远源杂交育种与外源有益性状导入  8-12
    1.1 小麦黄矮病  8
    1.2 小麦穗发芽  8-10
    1.3 向普通小麦导入外源有益性状  10-12
  2. 外源导入物的检测  12-15
    2.1 分子标记检测外源导入物  12
    2.2 EST 与基于EST 标记  12-15
      2.2.1 EST 与EST 数据库  12-13
      2.2.2 利用丰富的EST资源开发EST-PCR标记  13
      2.2.3 EST-PCR 标记的优点及应用现状  13-15
  3. 研究目的和技术路线  15-16
    3.1 研究目的  15
    3.2 技术路线  15-16
第二章：研究报告  16-44
  1. 实验材料  16-17
    1.1 植物材料  16-17
    1.2 已定位小麦族 EST(mapped wEST)－EST-PCR 标记的起源  17
  2. 实验方法  17-29
    2.1 材料种植及DNA 提取  19
    2.2 wEST 的选择与下载  19-21
    2.3 wEST 序列内含子的预测及引物设计  21-23
    2.4 PCR 扩增  23-24
    2.5 PCR 产物分离  24-26
      2.5.1 AGE  24
      2.5.2 PAGE  24-26
      2.5.3 SSCP  26
    2.6 特异带的回收、克隆测序及比对  26-29
      2.6.1 回收  27
      2.6.2 克隆与测序  27-29
      2.6.3 特异序列的比对分析  29
  3. 实验结果  29-40
    3.1 2Ai-2 染色体特异的标记开发结果  29-34
      3.1.1 2Ai-2 染色体特异标记  29-33
      3.1.2 小麦染色体特异的标记  33
      3.1.3 特异带的回收、克隆测序、与比对结果  33-34
    3.2 2H 染色体特异EST-PCR 标记的开发结果  34-40
  4. 讨论  40-43
    4.1 中间偃麦草－小麦－大麦基因组差异性比较基因组学在本研究中的应用与证据  40
    4.2 Intron-Flanking 思想在提高特异标记开发效率上的关键作用  40-41
    4.3 原理与经验：如何提高PAGE 与SSCP 的分离效果  41-42
    4.4 EST-PCR 标记开发的普遍意义  42-43
  5. 全文结论  43-44
参考文献  44-50
附录  50-53
致谢  53-54
作者硕士期间成果  54-55
摘要  55-56
Abstract  56

小麦近缘种EST-PCR分子标记的开发研究

内容摘要

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