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家蝇胚胎细胞抗菌肽对肿瘤细胞抑制作用的实验研究

作　者: 张金花
导　师: 万启惠
学　校: 遵义医学院
专　业: 免疫学
关键词: 家蝇胚胎细胞抗菌肽人黑色素瘤细胞(A375) 人髓样白血病细胞(K562) 抗癌活性
分类号: R73-3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:用脂多糖(LPS)刺激家蝇胚胎细胞产生抗菌肽,提取抗菌肽,研究所提取的抗菌肽对人黑色素瘤细胞(A375)和人髓样白血病细胞(K562)的抑制作用。方法:(1)应用含20mg/L脂多糖的无血清M3培养基作用于处于对数生长期的家蝇胚胎细胞16h,提取上清液中的抗菌肽。(2)将提取的抗菌肽用PBS配制成40、80、160、320、640μg/mL五个浓度组,分别作A375细胞和K562细胞的MTT实验,对照组采用等量PBS,观察抗菌肽对两种肿瘤细胞的抑制作用。同时以人脐静脉血管内皮细胞作为正常对照组。(3)用MTT法对上述五种浓度作A375细胞和K562细胞的生长曲线,正常组采用等量培养基。(4)用Annexin V-Fitc凋亡检测试剂盒测定五种浓度的抗菌肽是否引起A375细胞和K562细胞的早期凋亡及其随浓度变化时凋亡率的变化,正常对照组采用等量PBS和培养基。(5)流式细胞仪检测五种浓度抗菌肽对A375细胞和K562细胞细胞周期及凋亡的影响,正常对照组采用等量PBS和培养基。(6)流式细胞仪测定高三尖杉酯碱和家蝇胚胎细胞抗菌肽对K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率。结果:(1)抑菌实验显示家蝇胚胎细胞抗菌肽对大肠杆菌有抑菌活性。(2)MTT法检测显示五种浓度抗菌肽对A375细胞和K562细胞均具有抑制作用,与正常对照组相比,差异有显著性(P＜0.05)。五种浓度抗菌肽对人脐静脉血管内皮细胞均无抑制作用,与正常对照组相比,差异无显著性(P＞0.05)。(3)在不同浓度抗菌肽作用下,K562细胞和A375细胞的生长受到明显的抑制,药物浓度越高、作用时间越长,对细胞的抑制作用越强。(4)各浓度组抗菌肽对A375细胞和K562细胞的早期凋亡率无显著性差异(P＞0.05)。(5)抗菌肽引起A375细胞的G2/M期升高,高浓度组(＞160μg/mL)可引起G0/G1期降低,PI明显升高。对K562细胞S期的影响与正常对照组相比差异有显著性(P＜0.05)。各浓度组均可引起K562细胞的G0/G1期升高,细胞增殖指数PI降低。与正常对照组相比,各浓度组引起的A375细胞和K562细胞细胞凋亡率差异无显著性(P＞0.05)。(6)对照组、高三尖杉酯碱组及家蝇胚胎细胞抗菌肽组对K562细胞的有效杀伤率分别为27.30%、80.48%和83.33%;对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率分别为44.00%、84.78%和36.37%。结论:(1)家蝇胚胎细胞抗菌肽对大肠杆菌具有抑菌活性。(2)家蝇胚胎细胞抗菌肽对人黑色素瘤细胞A375和人髓样白血病细胞K562两种肿瘤细胞均具有抑制作用,而对正常人脐静脉血管内皮细胞无抑制作用。(3)家蝇胚胎细胞抗菌肽对肿瘤细胞的抑制作用随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增强。(4)家蝇胚胎细胞抗菌肽对A375和K562两种肿瘤细胞的抑制机理可能主要是阻滞细胞周期的正常发育。(5)家蝇胚胎细胞抗菌肽与常用的化疗药物相比,优点在于能有效杀伤肿瘤细胞,但又不损伤正常人体细胞。

全文目录

1 家蝇胚胎细胞抗菌肽对肿瘤细胞抑制作用的实验研究  4-43
  1.1 主要中英文缩略词表  4-5
  1.2 中文摘要  5-7
  1.3 英文摘要  7-10
  1.4 前言  10-12
  1.5 材料与方法  12-18
  1.6 结果  18-27
  1.7 讨论  27-32
  1.8 结论  32-33
  附图  33-41
  1.9 参考文献  41-43
2 抗菌肽抗肿瘤作用的研究进展  43-54
3 致谢  54-55

家蝇胚胎细胞抗菌肽对肿瘤细胞抑制作用的实验研究

内容摘要

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