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研究目的探讨肝脏异型增生结节(dysplastic nodule, DN)癌变过程中病理形态、发生机制及癌变相关microRNAs的变化。试图明确在DN癌变过程中可能存在的病理诊断和鉴别诊断标准相关问题,明确DN和DN癌变患者预后的关系；了解DN癌变过程中可能发生的分子机制,分析这些分子变化是否对患者的预后有影响。筛选DN癌变相关特异性miRNA并预测癌变相关特异性靶基因。资料和方法1.收集本院病理科10年间所有诊断为DN或DN癌变或高分化肝癌的手术切除标本,应用新的诊断标准复片,并结合患者随访资料进行预后生存分析；2.将纳入研究的病例集成组织芯片,用免疫组织化学的方法检测GPC3、GS、E-cadherin、P53、Cyclin D1、CD34在DN和DN癌变组织的表达,并结合术后随访资料进行预后生存分析；3.应用microRNA表达谱芯片的方法筛选DN癌变过程相关特异性microRNA,并做靶基因预测。研究结果1.145例标本中,按现有病理标准诊断为DN66例,其中LGDN16例,HGDN50例,DN癌变72例,肝细胞癌7例；原病理诊断为DN 96例,DN癌变49例,HCC 0例,与原病理诊断一致的有112例(77.2%),与原病理诊断不一致的有33例(22.8%),均为诊断不足,HCC诊断为HGDN或DN癌变7例,DN癌变诊断为HGDN26例。DN患者(n=41)和DN癌变患者(n=64)总体生存率(P=0.604)及无瘤生存率均无显著性差异(P=0.783)；伴发进展期HCC的DN或DN癌变患者(n=40)与不伴发进展期HCC的DN或DN癌变患者(n=51)总体生存率有显著性差异(P=0.004),但无瘤生存率无统计学差异(P=0.079)；在首次发现且不伴进展期HCC的DN患者(n=16)和DN癌变患者(n=35)总体生存率(P=0.677)和无瘤生存率(P=0.700)均无显著差异；2.组织芯片共制成9个蜡块,361个点,8个标记点,83个DN癌变点,123个DN点,147个瘤旁硬化组织点,按癌、DN、癌旁,或DN、周围组织排列。GPC3在癌变区、DN区和硬化组织区的阳性率分别为46.99%,9.35%,2.84%,且在三者间有统计学差异(P=0.000,0.000,0.026),GPC3对DN癌变的敏感性为46.99%,特异性为72.22%。GS在癌变区、DN区和硬化组织区的阳性率分别为72.29%,22.03%,5.63%,且在三者均有统计学差异(P=0.000,0.000,0.000)；GS对DN癌变检出的敏感性为72.29%,特异性为63.83%。GS和GPC3联合使用检出DN癌变的敏感性为78.3%,特异性为85.7%。E-cad在DN癌变区、DN区和硬化组织区的阳性率分别为76.25%,74.14%,67.63%,DN癌变区与硬化组织之间、DN与硬化组织之间有显著性差异(P=0.000,0.000),癌变区和DN之间无显著差异(P’=0.404)。P53在DN癌变区阳性率为13.4%,DN阳性率为2.5%,硬化组织阳性率为0.7%,癌变区和DN区,癌变区和硬化组织区有显著性差异(P=0.000,0.000),DN和硬化组织无显著差异(P=0.245)。CyclinD1在DN癌变区阳性率为39.5%,DN阳性率为32.8%,硬化组织阳性率为41.6%,三组间均无显著性差异。CD34在DN癌变区、DN区和硬化组织区的阳性率分别为80.5%,49.6%,22.0%,三者之间有显著性差异(P=0.000,0.000,0.000)。在DN及DN癌变中,GPC3、GS、E-cad、P53、CyclinD1、CD34在肿瘤组织呈阳性表达的患者和呈阴性表达的患者之间,总体生存率及无瘤生存率均无显著差异；3.在DN癌变过程中显著上调或下调的miRNA:上调表达：hsa-miR-532-5p, hsa-miR-1282, HS 176, hsa-miR-517a, hsa-miR-130a*, hsa-miR-154, hsa-miR-512-5p, hsa-miR-200c;下调表达：hsa-miR-122*, solexa-603-1846, hsa-miR-93, hsa-miR-1274a, hsa-miR-1184, hsa-miR-146b-5p, hsa-miR-34a*, hsa-miR-15a, hsa-miR-25, hsa-miR-1304。经筛选,选定hsa-miR-200c、hsa-miR-25作为可能目的miRNA进行靶基因预测,hsa-miR-200c的靶基因可能为ZEB2、ERRFI1、TMEFF2; hsa-miR-25的可能靶基因为RAB23、USP28、MOAP1。研究结论1.应用新的DN和DN癌变病理诊断标准可以较好地发现和诊断DN和DN癌变病例,DN癌变的主要鉴别点为间质浸润。经手术切除的DN患者和DN癌变患者总生存率和无瘤生存率均无差异,说明DN和DN癌变病灶及时手术切除治疗能够得到较好的治疗效果。伴或不伴肝癌的DN及DN癌变患者无瘤生存率无差异,伴进展期肝癌的DN及DN癌变患者较不伴肝癌者总体生存率低,提示DN和DN癌变的患者预后较进展期肝细胞癌好,DN存在的患者HCC复发风险较高。2. GPC3、GS、CD34是鉴别DN和DN癌变的有用指标。GS、GPC3、CD34上调表达贯穿肝细胞癌发展的整个过程；P53突变在HGDN不出现,在癌变时发生；E-cad在DN和DN癌变较周围硬化组织表达增加；Cyclin D1在HCC发生中可能不起主要作用,提示在肝硬化至DN至DN癌变过程中多个通路起作用。这些免疫组化标记对DN和DN癌变患者的预后无指导意义。3.在DN癌变,肝硬化直接发生HCC,无硬化肝组织发生HCC过程中,miRNA表达谱有较明显差异,提示这三种HCC发生的分子机制不甚相同。DN癌变过程中hsa-miR-200c、hsa-miR-25似乎是重要的癌变相关特异性miRNA,但需要大样本及细胞试验进一步验证。
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