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氨基甾体Z1对MEG-01白血病细胞的作用及其机理研究

作　者: 周阳
导　师: 何群
学　校: 中南大学
专　业: 生理学
关键词: 氨基甾体 MEG-01细胞 增殖分化 钙通道 bcr/abl融合基因 白血病
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：观察氨基甾体Z1对人慢性粒细胞白血病MEG-01细胞的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法：采用液体培养实验、MTT实验、集落培养实验观察氨基甾体Z1对MEG-01细胞的抑制增殖作用；采用Wright染色、醋酸AS-D萘酚酯酶(AS-D NAE)染色、细胞膜CD41表面标记物检测观察氨基甾体Z1对MEG-01细胞的诱导分化作用；为进一步了解氨基甾体Z1对MEG-01细胞的作用机制,采用荧光分光光度计检测MEG-01细胞内钙离子浓度([Ca2]i)的变化,采用实时荧光定量RT-PCR实验检测MEG-01细胞内钙通道蛋白mRNA及bcr/abl融合基因mRNA的表达变化。结果：1.氨基甾体Z1对正常人外周血细胞和MEG-01细胞增殖的影响连续培养1-5d,不同浓度的氨基甾体Zl (10-8-10-4mol/L)能抑制MEG-01细胞的增殖。MTT实验结果显示,10-6mol/L氨基甾体Z1作用于正常人外周血单个核细胞3d后,其MTT值为0.035±0.003,于对照组比较无显著差异(p>0.05)。10-8mol/L氨基甾体Z1作用5d后,MEG-01细胞的生长抑制率(GIR)为(50.87±11.67)%,药物浓度增高,GIR增大。集落形成实验显示氨基甾体Z1对正常外周血细胞无明显作用,但能抑制MEG-01细胞的增殖且呈浓度依赖。2.氨基甾体Z1对MEG-01细胞分化的影响氨基甾体Z1作用于MEG-01细胞第5d后Wright染色,与对照组比较,细胞核浆比例变小,细胞核不规则,核质变粗,胞浆增多,浅染,核周胞质出现淡染区。AS-D NAE染色后,处理组吸光值A较对照组明显升高(p<0.01)。流式细胞仪分析,10-6mol/L的氨基甾体Z1作用5d后,MEG-01细胞膜上CD41表面标记表达阳性率为76%。3.氨基甾体Z1抑制MEG-01细胞增殖及诱导其分化的机制研究(1)氨基甾体Z1对MEG-01细胞内[Ca2+]i的影响用Fura-2/AM负载MEG-01细胞,10-6mol/L的氨基甾体Z1处理1h后,荧光分光光度计检测其A值为(131.70±2.16),与对照组A值(166.58±2.47)比较显著降低(p<0.01)。(2)实时荧光定量RT-PCR检测氨基甾体Z1作用后MEG-01细胞TRPV6钙通道蛋白mRNA表达量的变化终浓度为10-6mol/L的氨基甾体Z1作用于MEG-01细胞第5d,提取其RNA进行逆转录及扩增,实时定量PCR进行相对定量,其钙通道蛋白基因相对含量为(2.3610.18)×10-3,与对照组(6.65±0.40)×10-3比较,TRPV6钙通道蛋白mRNA表达下调(p<0.01)。(3)实时荧光定量RT-PCR检测氨基甾体Z1作用后MEG-01细胞bcr/abl融合基因mRNA表达量的变化终浓度为10-6mol/L的氨基甾体Z1作用于MEG-01细胞第5d,提取其RNA进行逆转录及扩增,实时定量PCR进行相对定量,其bcr/abl融合基因相对含量为(2.22±0.18)×10-2,与对照组(6.21±0.22)×10-2比较,bcr/abl融合基因mRNA表达下调(p<0.01)。结论：1.氨基甾体Z1能显著抑制MEG-01细胞增殖,并呈一定的浓度依赖关系。但其对正常人外周血细胞无明显抑制作用。2.氨基甾体Z1能诱导MEG-01细胞向巨核细胞系分化。3.氨基甾体Z1作用于MEG-01细胞1h,可导致细胞内游离钙离子浓度下降,这可能与其阻断了钙通道有关。4.氨基甾体Z1能使MEG-01细胞TRPV6钙通道蛋白mRNA表达下调,这可能与其对MEG-01细胞抑制增殖和诱导分化的作用机制相关。5.氨基甾体Z1能使MEG-01细胞bcr/abl融合基因mRNA表达下调,这可能与其对MEG-01细胞抑制增殖和诱导分化的作用机制相关。

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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