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人参皂苷Rg1对人脐血CD34~+造血干细胞增殖分化及钙敏感受体的影响

作　者: 潘丽
导　师: 余丽梅
学　校: 遵义医学院
专　业: 药理学
关键词: 人参皂苷Rg1 脐带血 造血干细胞 增殖 分化 钙敏感受体
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 28次
引　用: 1次
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内容摘要


目的观察人参皂苷Rg1(ginsenosides Rg1, Rg1)对人脐血造血干细胞(human umbilical cord blood hemopoietic stem cells, hUCB-HSCs)增殖、分化的影响,并初步探讨其作用机制。方法密度梯度离心及免疫磁珠法分离hUCB-HSCs,流式细胞术检测人细胞分化抗原。分组处理培养hUCB-HSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态及计数集落,RT-real time PCR检测细胞CaSR (calcium-sensing receptor) mRNA水平,免疫荧光染色观测CaSR蛋白表达水平。结果磁式分选法分选所得hUCB CD34+ HSCs细胞百分比为(81.57±12.95)%,集落生成单位检测结果显示,培养14d时,与空白组相比,三氯化钆(Gadolinium chloride, GdCl3)和Rgl各剂量组爆式红系集落形成单位(burst-forming unit erythroid, BFU-E)、粒-巨噬细胞集落形成单位(colony forming unit-granulocyte macrophage, CFU-GM)、混合集落形成单位(colony forming unit-granulocyte, erythrocyte, macrophage, megakaryocytz, CFU-GEMM)集落形成数目均明显增高(P<0.05),而二氯化镉(cadmium chloride, CdCl2)组BFU-E、CFU-GM和CFU-GEMM集落形成数目均降低(P<0.05)。hUCB-HSCs培养前6d, hUCB-HSCs增殖缓慢,10-14 d细胞快速增殖数目达到最大,且与Rgl组相比,CdCl2+Rgl组细胞数显著降低,但较单独使用CdC12组细胞数多。与空白组相比,及GdCl3和Rgl各剂量组之间相比,hUCB-HSC培养14d后,表达CDllb+、CD15+、CD71+、GA+和CD61+细胞百分率均无明显差异(P>0.05)。hUCB-HSCs培养10d,Rg1CdC、CdCl2+Rg1组细胞CaSR mRNA表达水平均无显著差异；MACS分选当天(0 d), CD34+ hUCB-HSCs可见较强CaSR阳性表达绿色荧光,培养至第10 d,仍可见较强的CaSR阳性表达,与空白组比较,CdCl2、GdCl3、Rg1与Rgl+CdCl2各组之间荧光强度无显著差异。结论Rg1与CaSR激动剂GdCl3均可产生明显的促hUCB CD34+ HSCs增殖效应,但不影响HSCs向造血多谱系细胞分化的能力；Rgl的促CD34+ HSCs增殖效应可被CaSR阻断剂CdCl2明显抑制；hUCB CD34+ HSCs培养10 d, Rg1不影响细胞CaSR mRNA与蛋白表达；Rg1可能通过上调CaSR活性而促进hUCB CD34+HSCs增殖。这些结果提示,Rgl可能是一种CaSR的激动剂。

全文目录


中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
一、材料与方法  12-21
  1. 材判  12-14
  2. 方法  14-20
  3. 统计学处理  20-21
二、结果  21-30
  1. hUCB CD34+ HSCs的分离、纯化和鉴定  21
  2 Rg1对hUCB CD34~+ HSCs CFU集落数的影响  21-23
  3. Rg1对HUCB CD34~+ HSCs形成集落形态的影响  23-25
  4. Rg1对CD34~+ HSCs集落培养14d细胞数的影响  25-26
  5. CaSR阻断剂CdCl_2对Rg1促CD34~+ HSCs细胞增殖的影响  26-27
  6. Rg1对CD34~+ HSCs分化的影响  27-28
  7. Rg1对CD34~+ HSCs CaSR mRNA表达的影响  28
  8. CD34~+ HSCs培养第10d CaSR蛋白质的表达  28-30
三、讨论  30-32
四、结论  32-33
参考文献  33-36
综述  36-46
  参考文献  42-46
致谢  46-47
作者简介  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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