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蛹虫草多糖的分子结构及生物学活性研究

作　者: 吴凤瑶
导　师: 桂仲争
学　校: 江苏科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 蛹虫草 多糖 分离纯化 分子结构 体外抗氧化活性 免疫调节活性
分类号: S567.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


蛹虫草是我国名贵中药材冬虫夏草的一种合适替代品,而蛹虫草多糖则是蛹虫草中最重要、含量最为丰富的一种活性成分。近年来,蛹虫草多糖突出的免疫调节、抗肿瘤和抗氧化活性逐渐被人们所认识,蛹虫草多糖的研究已成为热点。因此,进一步研究蛹虫草多糖的分子结构、活性和构效关系等,对充分开发利用蛹虫草多糖具有重要意义。本研究以3种不同蛹虫草菌株（CM-jd、CM-hs及CM-js）接种大米培养基后得到大米子实体,和以CM-jd菌株接种鲜蚕蛹后得到的蚕蛹子实体为原料,采用水提醇沉法提取蛹虫草子实体多糖,再通过DEAE-52离子交换柱和Sephadex G-100凝胶柱层析进行分离纯化,得到了4种纯多糖组分:CM-jd-CPS、CM-hs-CPS、CM-js-CPS和CM-jd（Y）-CPS。紫外光谱（UVS）和气相色谱（GC）分析比较得出:4种多糖都是由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖,但其组成的摩尔比不同,CM-jd-CPS为1.52: 8.53: 1.00,CM-hs-CPS为1.35: 8.34: 1.00,CM-js-CPS为1.06: 2.31: 1.00,CM-jd（Y）-CPS为3.11: 1.00: 2.12。红外光谱（IR）分析结果显示,CM-jd-CPS、CM-hs-CPS和CM-js-CPS糖链结构相近,都是由α-糖苷键连接的含硫酸基的酸性多糖,糖环构型为吡喃型,含有乙酰氨基结构;CM-jd（Y）-CPS则是由β-糖苷键连接的含羧基的酸性多糖,糖环构型为吡喃型,也存在乙酰氨基结构。体外抗氧化试验结果表明,CM-jd-CPS、CM-hs-CPS、CM-js-CPS和CM-jd（Y）-CPS都具有较强的清除DPPH自由基和螯合Fe2+的能力。在多糖浓度为8 mg/mL时,对DPPH的清除率分别为94 %、89 %、84 %和93 %,对Fe2+的螯合率分别为72 %、85 %、55 %和89 %;同时都具有一定的总还原力。采用MTT法检测了蛹虫草多糖的体外免疫活性,4种多糖对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用明显,并呈现量效关系,同时能够特异性地促进T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖。CM-jd（Y）-CPS对小鼠脾淋巴细胞和T淋巴细胞的促增殖作用最强,增值率分别为41 %和17 %;CM-hs-CPS则对B淋巴细胞的促增殖作用最强,增值率为11 %。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-13
第1章 绪论  13-27
  1.1 真菌多糖  13-22
    1.1.1 真菌多糖的分布与来源  13-14
    1.1.2 真菌多糖的提取、分离与纯化  14-15
    1.1.3 真菌多糖的结构  15-16
    1.1.4 真菌多糖结构的分析方法  16-19
    1.1.5 真菌多糖的构效关系  19-22
  1.2 蛹虫草  22-24
    1.2.1 蛹虫草简介  22-23
    1.2.2 蛹虫草的人工培养现状  23
    1.2.3 蛹虫草中的化学成分  23-24
    1.2.4 蛹虫草的药理作用  24
  1.3 蛹虫草多糖的研究概况  24-26
    1.3.1 蛹虫草多糖的提取与分离纯化  24-25
    1.3.2 蛹虫草多糖的结构分析  25
    1.3.3 蛹虫草多糖免疫功能研究进展  25-26
    1.3.4 蛹虫草多糖研究存在的问题  26
  1.4 本研究的目的及意义  26-27
第2章 蛹虫草多糖的提取与分离纯化  27-34
  2.1 前言  27
  2.2 实验材料与方法  27-29
    2.2.1 实验材料、试剂和仪器  27-28
    2.2.2 方法  28-29
  2.3 结果与分析  29-31
    2.3.1 蛹虫草粗多糖的提取  29
    2.3.2 蛹虫草多糖含量的测定  29-30
    2.3.3 蛹虫草多糖的分离纯化  30-31
  2.4 讨论  31-32
  2.5 本章小结  32-34
第3章 蛹虫草多糖的分子结构分析  34-42
  3.1 前言  34
  3.2 实验材料与方法  34-36
    3.2.1 实验材料、试剂和仪器  34-35
    3.2.2 实验方法  35-36
  3.3 结果与分析  36-39
    3.3.1 紫外光谱分析  36
    3.3.2 气相色谱分析  36-38
    3.3.3 红外光谱分析  38-39
  3.4 讨论  39-41
  3.5 本章小结  41-42
第4章 蛹虫草多糖生物学活性研究  42-53
  4.1 前言  42
  4.2 实验材料与方法  42-45
    4.2.1 实验材料、试剂与仪器  42-43
    4.2.2 实验方法  43-45
  4.3 结果与分析  45-50
    4.3.1 对DPPH 自由基的清除能力  45-46
    4.3.2 总还原能力  46
    4.3.3 对Fe~(2+)铁离子的螯合能力  46-47
    4.3.4 对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响  47-48
    4.3.5 对小鼠脾淋巴细胞转化的影响  48-50
  4.4 讨论  50-52
  4.5 本章小结  52-53
结论  53-54
参考文献  54-60
攻读学位期间发表的学术论文  60-61
致谢  61

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 菌类 > 冬虫夏草
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