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益生菌发酵制备鳕鱼皮鱼皮多肽的初步研究
作 者: 王丹丹
导 师: 金海珠
学 校: 烟台大学
专 业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 益生菌 微生物复合发酵 鳕鱼鱼皮 多肽 分子量分布
分类号: TS254.9
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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引 用: 1次
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内容摘要
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胶原蛋白多肽是以胶原蛋白为原料,利用酶解法或微生物发酵法生产的多肽产品。与胶原蛋白相比胶原蛋白多肽具有良好的理化性质和生理活性。鳕鱼鱼皮含有丰富的胶原蛋白,且是目前国内主要水产品加工鱼皮下脚料,本文以鳕鱼鱼皮为原料,通过筛选具有分泌蛋白酶、脂肪酶活性和产酸活性的益生菌株进行混合发酵,制备具有较好溶解性和无鱼皮腥味的鱼皮多肽产品。本文通过从纳豆、酒曲、醋曲和海鱼胃肠道中共分离纯化得到104株具有蛋白酶、脂肪酶等酶活力和产酸能力的菌株。通过形态学观察、特殊的细胞结构、运动性等特征和生理生化特性,依据《伯杰氏细菌鉴定手册》、魏景超的《真菌鉴定手册》和《酵母菌的特征与鉴定手册》对微生物进行分类鉴定。同时利用分子生物学技术,对细菌进行了16SrDNA序列测定,以确定其分类地位。根据微生物鉴定结果,从中选出7株具有较高蛋白酶酶活力、脂肪酶活力和产酸能力的菌株,其中2株细菌(BNⅣ-7,JFX 80Y9),分别为蜡状芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌;1株霉菌(H-2),鉴定为黑曲霉;2株酵母(JQⅡJM白, 4-2大),鉴定为啤酒酵母和橙黄红酵母;2株产酸菌(fGYY-3,HYW-2),鉴定为枯草芽胞杆菌。利用复合菌种发酵鳕鱼鱼皮,以水解度为指标,采用单因子试验确定了最适发酵温度、最适接种量、发酵培养基的组成、产酶细菌:霉菌:酵母菌:产酸细菌的比例和发酵时间等发酵参数,通过均匀设计法优化了复合菌种发酵制备鱼皮多肽的发酵工艺。优化实验结果表明,最佳发酵条件为:发酵温度30℃,发酵培养基中鳕鱼皮:水的比例为1:0.5,接种量为8%,产酶细菌:霉菌:酵母菌:产酸细菌的比例为3:1:1:2,发酵时间为20h。此条件下水解度可达38.5%,发酵液气味较香馥,口感较柔和,没有鱼腥味。从发酵液中采用乙醇分离的方法提取鱼皮多肽,并且通过冷冻干燥得到鱼皮多肽粗品,采用凝胶柱进行高效液相层析,得到鱼皮多肽的分子量分布图谱,结果表明,发酵所得到的多肽集中在4000Da以下,小分子量多肽含量较高,发酵效果较好。
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全文目录
摘要 4-5 Abstract 5-8 1 绪论 8-19 1.1 引言 8 1.2 胶原蛋白和胶原蛋白多肽 8-10 1.2.1 胶原蛋白和胶原蛋白多肽的研究现状 9 1.2.2 胶原蛋白和胶原蛋白多肽的应用 9-10 1.3 水产品下脚料的加工和利用研究现状 10-12 1.3.1 鱼头、鱼骨的加工与利用 11 1.3.2 鱼鳞的加工与利用 11-12 1.3.3 鱼皮的加工与利用 12 1.4 益生菌的研究 12-16 1.4.1 益生菌的研究现状 13 1.4.2 益生菌的应用 13-14 1.4.3 益生菌的功能 14-16 1.5 微生物发酵 16-17 1.5.1 纯种发酵的优点与缺点 16-17 1.5.2 混合发酵的优点 17 1.6 本课题研究的立题背景、意义和内容 17-19 1.6.1 立题背景及研究意义 17-18 1.6.2 研究内容 18-19 2 益生微生物的分离纯化 19-32 2.1 引言 19 2.2 材料与方法 19-22 2.2.1 实验材料 19-20 2.2.2 实验试剂 20 2.2.3 实验仪器及设备 20-21 2.2.4 实验方法 21-22 2.3 结果与讨论 22-31 2.3.1 纳豆和豆豉中益生微生物的分离纯化 22-24 2.3.2 菌肥中益生微生物的分离纯化 24-25 2.3.3 醋曲中益生微生物的分离纯化 25-26 2.3.4 酒曲中益生微生物的分离纯化 26-28 2.3.5 海鱼胃肠道中益生微生物的分离纯化 28-31 2.4 本章小结 31-32 3微生物的鉴定 32-47 3.1 引言 32 3.2 材料与方法 32-39 3.2.1 实验材料 32 3.2.2 实验试剂 32-33 3.2.3 实验仪器及设备 33-34 3.2.4 实验方法 34-39 3.3 结果与分析 39-46 3.3.1 酵母菌的鉴定结果 39-41 3.3.2 霉菌的鉴定结果 41-42 3.3.3 细菌的鉴定结果 42-46 3.4 本章小结 46-47 4多菌种发酵制备鱼皮多肽工艺的初步研究 47-58 4.1 引言 47 4.2 材料与方法 47-51 4.2.1 实验材料 47-48 4.2.2 实验试剂 48 4.2.3 实验仪器及设备 48-49 4.2.4 实验方法 49-51 4.3 结果与讨论 51-57 4.3.1 鳕鱼鱼皮成分测定 51 4.3.2 最适发酵条件确定 51-55 4.3.3 发酵工艺条件的优化 55-57 4.3.4 多肽粗品的制备 57 4.4 本章小结 57-58 5 鱼皮多肽分子量分布的研究 58-64 5.1 引言 58 5.2 材料与方法 58-60 5.2.1 实验材料 58 5.2.2 实验试剂 58-59 5.2.3 实验仪器及设备 59 5.2.4 实验方法 59-60 5.3 结果与分析 60-63 5.3.1 分子量标准曲线的绘制 60-62 5.3.2 鱼皮多肽分子量分布图谱的绘制 62-63 5.4 本章小结 63-64 6 总结及展望 64-66 6.1 论文主要结论 64-65 6.2 论文的创新之处 65 6.3 展望 65-66 致谢 66-67 参考文献 67-71 附录1 攻读学位期间发表的论文目录 71-72
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中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 水产加工工业 > 水产副产品加工及利用
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