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米糟蛋白的提取及制备高F值寡肽的研究

作　者: 华从伶
导　师: 朱恩俊
学　校: 南京财经大学
专　业: 食品科学
关键词: 米糟蛋白水洗双酶水解大米多肽活性炭高F值寡肽
分类号: TQ936
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

米糟是大米发酵生产味精,酒精,乳酸,淀粉糖等后剩下的副产物,其中蛋白质含量高达50%～60%,可用作制备蛋白粉,各种食品添加剂,或者制备各种具有生理活性的多肽。但目前,我国的企业一般将米糟作为动物饲料出售,造成优质蛋白资源多的极大浪费,因此如何利用米糟蛋白,提高其经济效益,就显得非常重要。高F值寡肽即指F值高于20的寡肽。医学实验证明,高值寡肽有很好的生理功能,如消除或减轻肝性脑症状,抗疲劳,改善蛋白营养,缓解酒精中毒,抑制癌细胞增殖,降低血清胆固醇浓度等等,有很强的应用价值。本文主要研究了米糟经过前处理后得到浓缩蛋白,然后以此为原料,经过两步酶解,得到含高F值寡肽和氨基酸的混合液,并用活性炭吸附,除去其中的游离氨基酸,从而得到纯度较高的高F值寡肽。具体研究内容如下:（1）将米糟粉碎,过100目筛后,用索氏抽提法去掉其中的脂肪,然后经过水洗,除去其中的可溶性物质,在此过程中,研究了水洗的温度,时间,料液比这三个因素,在单因素实验的基础上进行正交实验,利用SPSS统计软件分析实验数据,得到最优因素水平为:温度70℃,时间0.5h,料液比为1﹕10,在此条件下,得到的浓缩物中蛋白质含量为78.4%,第二次水洗后蛋白质含量达到了82.5%。（2）本文采用了响应面法来优化高F值寡肽的提取工艺。考虑到双酶水解中各酶都有很多因素,并且这些因素间可能会有交互影响,因此本文综合统筹考虑这些因素。在单因素实验的基础上,找出六个影响因素,然后通过Plackett-Burman实验设计来筛选出三个显著影响因素,分别是胰蛋白酶时间,风味蛋白酶时间,风味蛋白酶pH,然后用响应面的Box-Benhnken实验设计来分析这三个因素,得到合适的模拟回归方程。结果表明,回归方程确定系数为R²=0.9865。然后通过方程计算得到这三个因素的条件为:X₁=-0.25,X₂=0.44, X₃=-0.15,即即胰蛋白酶水解时间为1.75 h,风味蛋白酶水解时间为2.44 h,风味蛋白酶pH为5.85,代入方程得此时水解度为33.36%。（3）以双酶水解得到的多肽和氨基酸混合液为原料,选取活性炭作为吸附剂,除去其中的游离芳香族氨基酸,同时起到脱色效果。采用响应面的Box-Benhnken实验设计,以OD₂₂₀/OD₂₈₀为响应值,OD₂₂₀越大表明水解液中支链氨基酸越多,OD₂₈₀越小表明水解液中芳香族氨基酸越少,因此OD₂₂₀/OD₂₈₀越大表明水解液中支链氨基酸相对于芳香族氨基酸越多。得到活性炭吸附的最佳工艺条件为:温度,时间,液固比,在此条件下,OD₂₂₀/OD₂₈₀达到了50.40。（4）氨基酸分析仪测定双酶水解液中的氨基酸成分,从而计算得到其F值为37.62;然后通过蛋白纯化系统测得其多肽分子量组分集中在两个分子量段,分别是:300-500的组分,700-1020的组分。这完全符合高F值寡肽的要求。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
第一章前言  10-21
  1.1 大米蛋白研究  10-13
    1.1.1 大米蛋白概述  10-11
    1.1.2 大米蛋白制备方法研究  11-13
  1.2 大米多肽功能性质概述  13-16
    1.2.1 大米多肽的抗氧化性  13-14
    1.2.2 大米多肽的降血压活性  14-15
    1.2.3 大米多肽的其他活性功能  15-16
  1.3 高F 值寡肽概述  16-18
    1.3.1 高F 值寡肽定义  16
    1.3.2 高F 值寡肽功能  16-18
  1.4 高F 值寡肽研究现状  18-19
  1.5 课题研究的目的和意义  19
  1.6 课题研究主要研究内容  19-21
第二章除杂法提高米糟蛋白质含量的研究  21-27
  2.1 材料与方法  21-22
    2.1.1 材料与试剂  21
    2.1.2 仪器与设备  21-22
    2.1.3 方法  22
  2.2 结果与讨论  22-26
    2.2.1 米糟的主要组分含量  22-23
    2.2.2 米糟脱脂的条件  23-25
    2.2.3 米糟水洗除杂条件  25-26
  2.3 结论  26-27
第三章米糟蛋白质双酶水解制备多肽液研究  27-38
  3.1 材料与方法  27-30
    3.1.1 材料  27
    3.1.2 主要仪器  27
    3.1.3 试剂  27-30
  3.2 结果与讨论  30-36
    3.2.1 内切蛋白酶水解效果的比较研究  30-31
    3.2.2 外切蛋白酶水解效果的比较研究  31
    3.2.3 双酶水解条件优化研究  31-36
  3.3 验证试验  36-37
  3.4 结论  37-38
第四章多肽液纯化的研究  38-47
  4.1 试验材料与方法  38-39
    4.1.1 材料与试剂  38
    4.1.2 实验方法  38-39
  4.2 结果与讨论  39-45
    4.2.1 活性炭吸附的单因素实验  39-42
    4.2.2 Box-Benhnken 试验设计及结果分析  42-45
  4.3 验证试验  45-46
  4.4 吸附后水解液中氨基酸的组成  46
  4.5 结论  46-47
主要结论  47-49
展望  49-50
论文创新点  50-51
参考文献  51-55
攻读硕士学位期间研究成果  55-56
致谢  56

米糟蛋白的提取及制备高F值寡肽的研究

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