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HCV core蛋白与人胰腺colipase蛋白相互作用的初步研究

作　者: 柴艳云
导　师: 赵龙凤
学　校: 山西医科大学
专　业: 传染病学
关键词: 丙型肝炎病毒 HCV核心蛋白真核表达酵母双杂交免疫共沉淀哺乳动物双杂交
分类号: R512.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

背景:丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)慢性感染可导致肝脏慢性炎症、坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化,甚至肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。统计学资料表明:HCV感染与肝脏脂肪变、糖尿病等代谢性疾病的发生有一定的相关性。肝脏脂肪变性也是慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)的主要组织学表现之一,提示CHC也是一种代谢性疾病。HCV感染可导致代谢综合征(metabolic syndrome,MS)的发生,表现为肝脏脂肪变及胰岛素抵抗等。胰腺细胞分泌蛋白与糖脂代谢密切相关。有研究表明,HCV核心蛋白(HCV core)与宿主细胞相互作用在肝脂肪变中起重要作用。目的:为进一步研究HCV core蛋白与宿主胰腺细胞的相互作用。方法:1、将酵母细胞表达载体pGBKT7-core转化AH109酵母菌株,与含有胰腺细胞文库质粒的Y187酵母菌株进行配合,行酵母双杂交,筛选人胰腺中HCV core蛋白结合蛋白基因。2、应用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription PCR,RT-PCR),扩增人胰腺colipase基因。3、构建真核表达质粒pcDNA-3.1-myc-his-clps及pcDNA3.1(-)core,通过真核表达系统,应用免疫共沉淀技术及Westem blotting方法证实HCV core蛋白与人胰腺colipase蛋白在细胞内的相互作用。4、构建真核表达质粒pACT-clps及pBIND-core,通过真核表达系统,应用哺乳动物双杂交技术证实HCV core蛋白与人胰腺colipase蛋白在细胞内的相互作用。结果:1、成功筛选出人胰腺细胞中11种与HCV core蛋白存在相互作用的已知功能蛋白。2、成功扩增人胰腺colipase基因。3、成功构建colipase基因的真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-clps,证实HCV core蛋白与人胰腺colipase蛋白在细胞内存在相互作用。4、成功构建colipase基因的真核表达载体pACT-clps,证实HCV core蛋白与人胰腺colipase蛋白在细胞内存在相互作用。结论:本实验成功筛选人胰腺中HCV core蛋白结合蛋白基因,并证实HCV core蛋白与人胰腺colipase蛋白在细胞内存在相互作用,为下一步研究HCV core的作用机制奠定基础。

全文目录

主要仪器设备  5-6
英文缩略词表  6-7
中文摘要  7-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
正文  12-44
  第一部分酵母双杂交技术筛选人胰腺cDNA文库中HCV核心蛋白结合蛋白基因  12-21
    引言  12
    材料和方法  12-16
    结果  16-18
    讨论  18-21
  第二部分免疫共沉淀技术验证HCV core 蛋白与人胰腺colipase 蛋白间的相互作用  21-33
    引言  21
    材料和方法  21-30
    结果  30-31
    讨论  31-33
  第三部分哺乳动物双杂交技术验证HCV core 蛋白与人胰腺colipase 蛋白间的相互作用  33-40
    引言  33
    材料和方法  33-36
    结果  36-38
    讨论  38-40
  结论  40-41
  参考文献  41-44
相关综述  44-50
个人简历  50-51
致谢  51

HCV core蛋白与人胰腺colipase蛋白相互作用的初步研究

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