学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

Lrrc10与Srf相互作用以及Nulp1的细胞功能学研究

作　者: 杨青
导　师: 莫小阳；吴秀山
学　校: 湖南师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 心肌肥厚免疫共沉淀 GST Pull-Down 基因亚克隆
分类号: R541
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 6次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

心脏病是危害人类健康的严重疾病,是造成死亡的首要原因。从分子水平上系统地研究控制心脏发育的基因及其相互调控关系是攻克这一顽症的首要关键步骤。本研究室前期克隆了人类Lrrc10基因。并且通过Western blot实验分析了Lrrc10蛋白在小鼠成体和人胚胎的各个组织中的表达情况,证明了Lrrc10是心脏特异表达因子。免疫共沉淀和GST Pull-Down证明了Lrrc10与Srf能够相互作用,并验证了Lrrc10是通过抑制Srf对ANF的激活作用来抑制心肌肥厚的,而本研究工作主要就是进一步分析Lrrc10是如何与Srf发生相互作用的。首先对Lrrc10和Srf基因分别进行亚克隆,然后对亚克隆片段分别进行免疫共沉淀,GST PULL-DOWN及信号途径分析,其结果显示Lrrc10是以Lrr保守结构域为单位与Srf进行相互作用,而Srf则是通过MADS这个结构域与Lrrc10发生相互作用的。并且由于前期工作表明Lrrc10可能介导了心肌肥厚的抑制,所以本实验中制备了人源的Lrrc10抗体,并对ISO刺激的病理性肥厚小鼠和人的心肌肥厚标本的Lrrc10表达进行了检测,结果显示Lrrc10在肥厚样本中的表达是下调的。本实验室之前的研究结果提示,Nulpl可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制心肌分化。本研究通过亚细胞定位验证了Nulp1和β-catenin可能会在细胞内发生相互作用。并且通过western blot结果显示,在P19细胞系中,Nulp1的表达在第四天受到明显的抑制,这与本实验室之前利用RT-PCR技术分析获得的结果相一致。本研究进一步构建了Nulp1的P19过表达系和干扰系,利用DMSO对其进行诱导,利用western blot进行检测,结果表明,过表达Nulp1时P19心肌细胞的分化与对照组相比受到了明显的抑制,而敲低Nulp1的表达则促进P19心肌细胞的分化。这些实验结果进一步证明Nulpl可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制心肌分化。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
1. 引言和文献综述  9-22
  1.1 心脏发育  9-10
  1.2 脊椎动物心脏发育重要信号途径及机制的研究  10-13
  1.3 心肌肥厚的概述  13-14
  1.4 心脏发育及心肌肥厚相关的信号转导  14-20
  1.5 本文研究意义  20-22
2. 材料与方法  22-41
  2.1 材料  22-26
  2.2 方法  26-41
3. 实验结果及其分析  41-67
  3.1 LRRC10基因的拆片工作  41-42
  3.2 LRRC10的拆片与SRF体外发生相互作用  42-46
  3.3 LRRC10的拆片与SRF体内发生相互作用  46-47
  3.4 LRRC10的拆片与SRF相互作用的信号途径验证  47-48
  3.5 LRRC10的进一步拆片与SRF相互作用  48-56
  3.6 SRF的基因拆片工作  56
  3.7 SRF的拆片与LRRC10体外相互作用  56-58
  3.8 SRF的拆片与LRRC10体内相互作用  58-59
  3.9 LRRC10蛋白原核表达纯化及抗体制备  59-61
  3.10 LRRC10在病理性小鼠中的表达  61-62
  3.11 LRRC10在心肌肥大的病人中的表达  62
  3.12 NULP1与B-CATENIN免疫荧光分析  62-63
  3.13 病理性刺激小鼠心肌肥大NULP1的表达检测  63-64
  3.14 WESTERN BLOT检测NULP1抑制P19细胞的心肌分化  64-65
  3.15 WESTERN BLOT检测NULP1对心肌分化的影响  65-67
结语  67-69
参考文献  69-82
附录1  82-84
附录2  84-85
致谢  85-86

Lrrc10与Srf相互作用以及Nulp1的细胞功能学研究

内容摘要

全文目录

相似论文