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puma mRNA及其编码蛋白表达与非小细胞肺癌的相关性研究

作　者: 陈韵如
导　师: 王玉明
学　校: 昆明医学院
专　业: 临床检验诊断学
关键词: p53上调凋亡调控因子 非小细胞肺癌 RT-PCR mRNA 蛋白表达 细胞凋亡 末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法 免疫蛋白印迹技术
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的探讨p53上调凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis,puma）mRNA及其功能蛋白表达与肺癌的相关性。方法通过对实验条件的探讨,建立了实时荧光定量RT-PCR检测pumamRNA的方法。应用所建立的实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹法（Westem Blot,WB）检测40例肺癌患者的癌组织、癌旁组织和远癌组织及10例肺良性病变组织中pumamRNA及其编码蛋白表达的情况;其次,采用TUNEL检测其中20例肺癌患者的癌组织、癌旁组织和远癌组织的细胞凋亡状态。结果1.通过对实验条件的探讨,检测puma mRNA实时荧光定量RT-PCR反应体系为cDNA 1.0μl,dNTP 800μmol/L,Taq DNA聚合酶0.1 U/μl,Mg2+1.5mmol/L,1×Enhancersolution 5.0μl,10×buffer 5.0μl,上下游引物500nmol/L,0.5×SYB Green 1.0μl,总体积50μl。内参GAPDH体系中不加1×Enhancer solution,其余成分同上。扩增条件:94℃预变性5 min,94℃变性45 sec,56℃退火45 sec,72℃延伸45 sec,共40个循环,终末72℃延伸5 min。2.应用所建立的实时荧光定量RT-PCR检测puma mRNA表达的相对值,pumamRNA在癌组织、癌旁组、远癌组及肺良性对照组中均有表达,癌组织1.17±0.08、癌旁组织1.16±0.07、远癌组织1.18±0.07、肺良性病变对照组织1.17±0.11。经方差分析,puma mRNA的表达在同一病例的癌组织、癌旁组织和远癌组织之间差异无统计学意义（F=0.416,P＞0.05）,puma mRNA在肺癌组织和肺良性病变的表达量差别无统计学意义（F=0.264,P＞0.05）。而且鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织、癌旁组织和远癌组织中puma mRNA水平差异无统计学意义（F=0.3 11,P＞0.05;F=0.338,P＞0.05;F=0.329,P＞0.05）。3.PUMA蛋白检测结果显示:癌组织、癌旁组织及远癌组织的PUMA表达量分别为0.98～1.74（1.30）;0.72～1.69（1.11）;0.71～1.49（1.01）;10份肺良性组织标本的均值为1.17±0.11。经秩和检验分析,在同一病例的癌组织、癌旁组织和远癌组织的PUMA蛋白表达差异无统计学意义（x2（H）=4.918,P＞0.05）;PUMA蛋白在肺癌组织和肺良性病变的表达量差别无统计学意义（x2（H）=5.092,P＞0.05）。WB结果还显示鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织、癌旁组织和远癌组织中PUMA表达水平差异无统计学意义（F=0.101,P＞0.05;F=0.599,P＞0.05;F=1.054,P＞0.05）,表明PUMA表达水平与肺癌的病理分型、是否淋巴结转移和TNM分型无关。4.TUNEL结果显示:癌组织、癌旁组织和远癌组织AI分别是:4.96%±1.63%,1.45%±0.46%,1.26%±0.42%。癌组织的AI高于癌旁组织和远癌组织,AI差异有统计学意义,Z=-3.920,P=0.000;同时癌旁组织与远癌组织之间AI的差异也有统计学意义,Z=-0.-3.469,P=0.001。结论从puma mRNA、蛋白表达和细胞凋亡等几方面表明,puma表达可能不是伴随肺癌发生和发展过程的重要因素;mRNA和蛋白表达水平与肺癌的组织类型和病理分型无关。本研究结果与体外细胞株的研究结果不一致,而与其他肿瘤组织的研究结果一致,说明puma在肿瘤的发生发展中,不同的组织有不同的表现,其在肺癌发生发展中的作用还有待进一步的研究,是否能作为肺癌诊断和治疗的新靶点还有待进一步的研究。

全文目录


一、论文  5-65
  1.中文摘要  5-7
  2.英文摘要  7-9
  3.缩略语表  9-13
  4.前言  13-18
    参考文献  16-18
  5.论文正文  18-65
    第一部分:puma mRNA 实时荧光定量 RT-PCR 方法的建立及其表达与肺癌的相关性研究  18-36
      实验材料  19-20
      实验方法  20-24
      结果  24-31
      讨论  31-34
      参考文献  34-36
    第二部分:非小细胞肺癌组织中 PUMA 蛋白的表达与细胞凋亡的相关性研究  36-65
      实验材料  36-43
      实验方法  43-50
      结果  50-57
      讨论  57-60
      参考文献  60-63
      结论  63-65
二、文献综述  65-73
三、发表文章  73-74
四、致谢  74

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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