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MARVELD1与组蛋白H3乙酰化及H4甲基化相互关系的研究

作　者: 梁宏健
导　师: 李钰
学　校: 哈尔滨工业大学
专　业: 遗传学
关键词: MARVELD1 组蛋白共定位 GST pull-down 免疫共沉淀
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本实验室前期研究发现MARVELD1(MARVEL domain containing 1)为一个候选的肿瘤抑制基因,定位于人类10号染色体长臂2区4带2亚带(10q24.2),其mRNA全长3238bp,共有两个外显子,编码蛋白分子量为18.9 kD,具有抑制肿瘤增殖并导致细胞周期阻滞的作用。前期研究结果提示,MARVELD1可能与组蛋白及其修饰形式存在相互作用,本课题采用过表达MARVELD1的肺癌A549及肝癌HepG2细胞系,并在A549/ MARVELD1及HepG2/ MARVELD1细胞中进行MARVELD1/V5融合蛋白与组蛋白及其修饰形式的共定位分析。结果表明MARVELD1与组蛋白H3.1,H4,H4 K20 me1以及H4 K20 me3在有丝分裂前期存在共定位。为进一步研究MARVELD1与组蛋白及其修饰形式的相互关系,本课题构建pGEX-4T-2/MARVELD1重组体,并在Rosetta(DE3)大肠杆菌中成功原核表达GST/MARVELD1融合蛋白,应用GST pull-down技术体外验证MARVELD1与组蛋白及其修饰形式的相互关系。实验结果显示MARVELD1与组蛋白H3.1以及乙酰化组蛋白H3 K9/14不存在相互作用,而在组蛋白H4中,MARVELD1与组蛋白H4 K20 me1存在相互作用,进一步的免疫共沉淀实验也证实MARVELD1与组蛋白H4 K20 me1的相互作用。但是MARVELD1与非修饰组蛋白H4 K20和组蛋白H4 K20 me3不存在相互作用。另外,本课题应用Western blotting技术,在过表达MARVELD1的A549细胞系中分析MARVELD1对组蛋白及其修饰形式的影响。结果表明MARVELD1的高表达导致乙酰化组蛋白H3 K9/14的表达下调,非修饰组蛋白H4 K20和组蛋白H4 K20 me3的表达上调。同时,对于与MARVELD1相互作用的组蛋白H4 K20 me1,MARVELD1的高表达导致其表达降低。分析得到MARVELD1可能通过其它途径影响组蛋白的表达。鉴于组蛋白H4 K20 me1在细胞周期、基因组的稳定、染色质的凝聚压缩和异染色质的形成、基因的转录调控以及X染色体的失活等方面起到重要作用,本课题的研究结果提示MARVELD1的功能可能与其相关,也为MARVELD1的进一步研究奠定了基础。

MARVELD1与组蛋白H3乙酰化及H4甲基化相互关系的研究

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