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丹参内生真菌群落结构研究

作　者: 戴国君
导　师: 严铸云
学　校: 成都中医药大学
专　业: 生药学
关键词: 丹参 内生真菌 PCR-DGGE 分离鉴定 道地性分析
分类号: S567.53
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


丹参(Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma)为唇形科(Labiatae)植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。主要含脂溶性丹参酮类和水溶性酚酸类两类活性成分,脂溶性成分主要有丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ等,水溶性成分主要有丹酚酸B、丹参素、丹酚酸A、迷迭香酸等酚酸类成分。主产河南、山东、四川、江苏、山西、河北、安徽等地。已有研究表明,丹参质量受遗传、气候、土壤因子等因素的影响；但其道地性的形成机制仍缺乏定论。内生真菌与宿主形成共生体,参与了宿主的整个生命活动；本研究试图从共生体角度诠释丹参道地性的微生态机制。首先,采用纯培养方法,进行了四川、山东、河南和陕西等产区丹参根内生真菌的分离和形态鉴定,获得丹参内生真菌353株,为1纲3目36属。表明丹参内生真菌存在丰富多样性,而以镰孢属(Fusarium)和无孢类(Mycelia Sterilia)为优势种群。其次,采用PCR-DGGE技术,基于18S rDNA的序列分析,对分离得到的纯培养菌株进行分子鉴定。结果表明,四川、山东、河南和陕西产区的丹参内生真菌有3纲5目8科20属；其中,四川产区有8属,河南产区16属,山东产区17属,陕西8属,镰孢属是其共有优势属;而以山东丹参内生真菌类群最为丰富,且具有4个特有种群。也显示PCR-DGGE技术较传统的形态鉴定方法具有一定优势。丹参内生真菌的种群多样性、遗传多样性和系统发育分析表明,丹参内生真菌群落构成具有明显的地域性,地理位置越接近其遗传距离也就越接近。丹参内生真菌类群与10种有效成分含量进行相关性分析,Phoma属内生真菌的存在与丹参药材中脂溶性的隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量呈显著负相关：Byssochlamys属内生真菌的存在与丹参中水溶性成分咖啡酸和原儿茶醛的含量呈极显著正相关。总之,本研究分离、纯化、鉴定和保存了全国丹参的内生真菌资源,初步证实了内生真菌与丹参品质形成具有关联性,探讨了丹参道地性形成的微生态机制,也为进一步开展丹参内生真菌活性菌株筛选研究提供基础材料和实验数据。

全文目录


中文摘要  7-8
Abstract  8-10
1 引言  10-15
  1.1 丹参品质影响因素研究概况  10-11
    1.1.1 遗传因素研究  10
    1.1.2 环境因素研究  10-11
  1.2 内生真菌与宿主关系的研究概况  11-13
    1.2.1 内生真菌在宿主中的分布特点  11-12
    1.2.2 内生真菌对宿主的侵染特点  12
    1.2.3 内生真菌与宿主的生态关系  12-13
  1.3 本课题研究的目的和意义  13-15
    1.3.1 研究目标和意义  13-14
    1.3.2 研究内容  14
    1.3.3 技术路线  14-15
2 丹参内生真菌的分离与形态学鉴定  15-23
  2.1 实验材料  15
  2.2 实验仪器及试剂  15-16
  2.3 实验方法  16-17
    2.3.1 培养基配制  16
    2.3.2 丹参内生真菌的分离  16
    2.3.3 丹参内生真菌的纯化和保藏  16
    2.3.4 丹参内生真菌的鉴定  16-17
  2.4 实验结果  17-21
    2.4.1 丹参内生真菌种群  17-18
    2.4.2 丹参内生真菌的种群特点  18-21
  2.5 小结与讨论  21-23
3 道地产区丹参内生真菌DGGE分析  23-42
  3.1 实验材料  23
  3.2 试剂与仪器  23-24
  3.3 实验方法  24-28
    3.3.1 丹参内生真菌DNA的提取  24-25
    3.3.2 18S rDNA的PCR扩增  25-26
    3.3.3 变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析  26-28
  3.4 实验结果  28-40
    3.4.1 内生真菌的鉴定结果  28-30
    3.4.2 丹参内生真菌的种群多样性分析  30-35
    3.4.3 丹参内生真菌类群的遗传多样性分析  35-36
    3.4.4 丹参内生真菌的系统分析  36-40
  3.5 小结与讨论  40-42
4 内生真菌与丹参有效成分的相关性分析  42-49
  4.1 实验材料  42
  4.2 实验方法  42-43
    4.2.1 质量分析方法  42
    4.2.2 数据分析方法  42-43
  4.3 实验结果  43-48
    4.3.1 脂溶性成分与内生真菌的相关性  43-45
    4.3.2 水溶性成分与内生真菌的相关性  45-48
  4.4 小结与讨论  48-49
5 结论与分析  49-53
  5.1 结论  49
  5.2 创新点  49-50
  5.3 展望  50-51
  参考文献  51-53
6 文献综述 植物内生真菌研究概况  53-71
  6.1 内生真菌研究概况  53-60
    6.1.1 内生真菌的内涵  53
    6.1.2 药用植物内生真菌普遍性与多样性  53-57
    6.1.3 内生真菌与与药用植物的互作  57-59
    6.1.4 内生真菌对环境生物的作用  59
    6.1.5 内生真菌与宿主互作的机制  59-60
      6.1.5.1 生理机制  59
      6.1.5.2 分子机制  59-60
  6.2 内生真菌群落结果的研究方法  60-64
    6.2.1 分离培养技术和形态学鉴定  60-61
    6.2.2 分子生物学方法  61-64
  参考文献  64-71
致谢  71-72
在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  72-73

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 喜阴药物 > 其他
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