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高强度聚焦超声对铜绿假单胞菌生物膜的影响

作　者: 朱秀菊
导　师: 余加林
学　校: 重庆医科大学
专　业: 儿科学
关键词: 铜绿假单胞菌 生物膜 高强度聚焦超声
分类号: R310
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


【目的】研究高强度聚焦超声(High-Intensity Focused Ultrasound ,HIFU)对体外铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)生物膜(biofilm, BF)杀菌作用和对其结构的影响。【方法】体外培养建立铜绿假单胞菌PAO1生物膜3 d,6 d模型,每组分为对照组(假照射)和干预组(HIFU组),平板计数法计算HIFU对BF菌落数的影响,荧光探针FITC-ConA染细菌胞外多糖置于荧光显微镜下观察HIFU作用前后多糖差别,荧光探针SYTO9/PI标记BF内细菌、激光共聚焦显微镜摄取不同层面的图像采用Image Pro Plus 6.0分析HIFU干预后细菌的死亡率和运用BF图象结构分析软件(Image Structural Analyzer, ISA)对HIFU作用前后的BF结构参数进行定量分析。【结果】(1)3d组菌落计数HIFU干预组与对照组分别为(4.72±1.06)Lg CFU/ml和(7.64±0.16)Lg CFU/ml,t=7.35,P<0.05;6d组菌落计数干预组与对照组分别为(5.02±0.96)Lg CFU/ml和可见HIFU干预后EPS减少。(3)Image Pro Plus 6.0( IPP )分析显示:3d组死菌比例干预组与对照组分别为(55.66±7.28)%和(39.74±7.54)%,t=8.99, P<0.05;6d组干预组与对照组分别为(60.05±4.00)%和(43.36±6.56)%,t=12.85, P<0.05。(4)图像分析软件(ISA)定量分析显示:3d组模型BF厚度干预组与对照组分别为(5.11±0.92)μm和(8.06±0.79)μm, t=6.89, P<0.05,区域孔率(areal porosity,AP)分别为0.89±0.26和0.50±0.17,t=3.51, P<0.05,平均扩散距离(average diffusion distance, ADD)分别为1.57±0.03和3.12±1.69 , t=-2.61, P<0.05 ,结构熵( textual entropy , TE )分别为3.82±0.63和5.57±0.45,t=-6.75, P<0.05;6d组模型BF厚度干预组与对照组分别为为(7.77±0.48)μm和(21.33±4.76)μm,t=7.94, P<0.05,AP分别为0.97±0.02和0.35±0.14,t=-6.75, P<0.05 ,ADD分别为1.56±0.09和2.28±0.57,t=3.53, P<0.05,TE分别为4.31±1.16和6.17±0.65,t=3.96, P<0.05【结论】经HIFU干预后铜绿假单胞菌生物膜中细菌死亡率增加和生物膜空间结构被破坏。第二部分不同高强度聚焦超声对体外铜绿假单胞菌生物膜空间结构的影响【目的】探讨不同强度的高强度聚焦超声(High-Intensity Focused Ultrasound ,HIFU)对体外铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)生物膜(biofilm, BF)空间结构的影响。【方法】体外培养建立铜绿假单胞菌PAO1生物膜3 d模型,HIFU输出功率分别为40 W和60 W,MTT法计算不同强度HIFU干预前后铜绿假单胞菌BF菌落数的变化,激光共聚焦显微镜摄取SYTO9/PI染色后的BF图像并运用图象结构分析软件(Image Structural Analyzer, ISA)对HIFU作用前后的BF结构参数进行定量分析。【结果】1.MTT:对照组、40 W组和60 W组的菌落数分别为(5.10±0.87、3.13±0.29和1.30±0.36 )*10^7 CFU/ml,各组间经统计学比较,均有显著差异性。2.ISA参数:BF厚度减少和结构熵(TE)减小,BF厚度和TE在三组间经统计学比较,显示相互之间均有显著性差异;平均扩散距离(ADD)减小,区域孔率(AP)增加, 40 W组和60 W组的ADD和AP与对照组相比有统计学差异,而两组间并无统计学差异。【结论】较高强度的HIFU对BF中的细菌杀灭作用更大,且破坏BF结构更强。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-13
前言  13-14
第一部分 高强度聚焦超声对体外铜绿假单胞菌生物膜的杀菌作用及其空间结构的影响  14-22
  1 材料和方法  14-17
  2 结果  17-19
  3 讨论  19-22
第二部分 不同强度高强度聚焦超声对体外铜绿假单胞菌生物膜空间结构的影响  22-29
  1 材料和方法  22-24
  2 结果  24-26
  3 讨论  26-29
全文总结  29-30
参考文献  30-33
论文图片  33-38
文献综述  38-46
  参考文献  41-46
致谢  46-47
攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医用一般科学
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