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沉默ClC-3氯通道基因对低分化鼻咽癌细胞周期的影响

作　者: 叶东
导　师: 陈丽新
学　校: 暨南大学
专　业: 生理学
关键词: C1C-3氯通道细胞周期 siRNA 鼻咽癌细胞细胞容积细胞周期蛋白D1
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：研究ClC-3 siRNA沉默C1C-3氯通道基因后对低分化鼻咽癌细胞周期的影响。方法：采用siRNA技术抑制低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞ClC-3基因的表达,流式细胞术检测siRNA的转染率,全细胞膜片钳技术记录容积激活性氯电流,图像分析软件Q500MC测量并计算细胞容积,免疫荧光检测C1C-3蛋白和cyclin Dl蛋白的细胞内分布,Western blot检测ClC-3蛋白和cyclin D1蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期分布。结果：(1)ClC-3 siRNA转染CNE-2Z细胞的转染率达到(63.8±3.8)%(n= 3)。Western blot结果显示,与空白对照组相比,用100nmol/L的ClC-3 siRNA转染鼻咽癌细胞后,ClC-3氯通道蛋白的表达减少(60.9±4.0)%(n=3,P<0.05),而无序siRNA组、转染试剂对照组的C1C-3蛋白的表达无明显改变(n=3,P>0.05)；(2)以47%低渗液作细胞外灌流时,空白对照组细胞容积激活性氯电流平均电流密度为(74.2±6.5) pA/pF (+80 mV), ClC-3 siRNA组细胞容积激活性氯电流平均电流密度为(13.7±4.1) pA/pF,比空白对照组减少(81.5±4.7)%(n=5,P<0.05);(3)ClC-3 siRNA组细胞的调节性容积回缩(regulatory volume decrease, RVD)能力显著减弱,低渗刺激25min时的RVD为(10.5±4.8)%(n=16),与对照组的(42.6±2.8)%(n=20)相比, RVD减少75.4%(P<0.01)；(4)与空白对照组相比,ClC-3 siRNA组G0/G1期细胞从(56.8±2.8)%增加到(69.9±3.0)%,S期细胞从(32.1±1.7)%减少到(23.5±1.5)%(n=3,P<0.05,而无序siRNA阴性对照组、转染试剂对照组的细胞周期分布无明显改变(P>0.05),表明沉默C1C-3氯通道基因的表达可使细胞周期停滞在G0/G1期；(5)免疫荧光分析和Western blot结果显示,与空白对照组细胞相比,ClC-3 siRNA组细胞的cyclin Dl蛋白表达减少了(40.3±2.0)%(n=3,P<0.05),而转染试剂对照组和无序siRNA组的cyclin D1蛋白表达无明显变化(n=3,P>0.05),表明ClC-3 siRNA可抑制cyclin D1蛋白的表达。结论：低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞表达C1C-3氯通道蛋白。ClC-3氯通道蛋白参与细胞周期调控,是调节细胞从G0/G1期进入S期的重要因素之一。C1C-3氯通道可能通过影响调节性容积回缩和调控cyclin D1蛋白的表达而影响细胞周期进程。

沉默ClC-3氯通道基因对低分化鼻咽癌细胞周期的影响

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