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吗啡依赖及戒断大鼠相关脑区CCK-8表达变化的研究

作　者: 刘振江
导　师: 马春玲
学　校: 河北医科大学
专　业: 法医学
关键词: 吗啡依赖与戒断 八肽胆囊收缩素 免疫组化 原位杂交 脑区特异性
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:吗啡是目前常用的阿片类成瘾药物之一。已有研究表明中枢多个脑区如前额叶皮质、蓝斑核、中脑腹侧被盖区、伏隔核、杏仁核、海马、尾状核、中脑导水管周围灰质等参与了吗啡依赖的形成,且作用不同。阿片类药物依赖涉及到神经系统多种神经递质、调质及神经肽的改变。其中八肽胆囊收缩素（CCK-8）作为目前已知的作用最强的内源性抗阿片肽,在中枢神经系统有着广泛的分布,参与了痛觉感受、食欲调节、记忆等生理过程,但其在吗啡依赖与戒断中的许多作用尚不清楚。因此,本实验通过运用免疫组化及原位杂交技术检测慢性吗啡依赖及戒断大鼠前额叶皮质、伏隔核、纹状体、海马、杏仁核、黑质、中脑导水管周围灰质、腹侧背盖区、蓝斑等脑区CCK-8表达的变化,为系统探讨CCK-8在吗啡依赖和戒断中的作用提供实验依据。方法:研究采用成年雄性Wistar大鼠36只,体重200g220g,随机分成3组,每组12只,组别为:生理盐水对照组（NS组）、吗啡依赖组（MOR组）、纳洛酮催促戒断组（NAL组）。以剂量递增法(10mg·kg-1, 20mg·kg-1, 30mg·kg-1, 40mg·kg-1, 50mg·kg-1)连续皮下注射吗啡5天,每天2次（8:00,20:00）,第6天给予吗啡注射2小时后,腹腔注射纳洛酮(5mg·kg-1)急性催促戒断,建立吗啡依赖及戒断模型。观察戒断症状,并以Gellert-Holtzman法评价造模是否成功。纳洛酮催促戒断后1小时灌注固定、取脑,应用脑模具切取前额叶皮质、伏隔核、纹状体、海马、杏仁核、黑质、中脑导水管周围灰质、腹侧被盖区、蓝斑等核团相应组织,制备脑片。分别采用免疫组织化学和原位杂交技术检测上述脑区CCK-8蛋白及CCK基因表达的变化。采用Image-Pro Plus图像分析系统测量各相关脑区阳性细胞的平均光密度值,应用SPSS13.0软件进行统计学处理,以P﹤0.05为差异有显著性。结果:1大鼠吗啡依赖及催促戒断模型的建立纳洛酮催促戒断后1小时内,观察到齿颤、湿狗样抖动、腹泻、血泪、流涎、跳跃、体重明显下降等戒断症状。纳洛酮注射后15分钟内,戒断组大鼠跳跃次数达10.92±3.99次,与盐水对照组和吗啡依赖组比较,差异显著（P<0.01）;戒断组大鼠体重下降（8.37±3.53g）,与盐水对照组（0.98±0.24g）和吗啡依赖组（0.91±0.26g）相比,具有显著性差异（P<0.01）,而盐水对照组与吗啡依赖组比较体重下降无显著性差异。戒断组Gellert-Holtzman评分为37.88±11.92,与盐水对照组（1.79±0.92）和吗啡依赖组（1.75±0.89）比较,具有显著性差异（P<0.01）;盐水对照组与吗啡依赖组Gellert-Holtzman评分无显著性差异。上述结果表明成功建立了吗啡依赖及戒断模型。2吗啡依赖及戒断大鼠相关脑区CCK-8蛋白表达的变化应用免疫组织化学方法检测了CCK-8在各组大鼠前额叶皮质、尾壳核、伏隔核、海马、杏仁核、黒质、腹侧被盖区、导水管周围灰质和蓝斑内的表达变化。结果发现:在前额叶皮质,免疫阳性细胞主要分布于内锥体层;在黑质,阳性细胞主要分布于黑质致密部,网状部仅有少量阳性细胞;在杏仁核,阳性细胞在杏仁核的各亚区均有分布;在海马结构,阳性细胞主要表达于齿状回多形层,而在CA1、CA2、CA3的锥体细胞层仅有少量分布;中脑腹侧被盖区、蓝斑核也有阳性细胞分布。但在尾壳核、伏隔核、中脑导水管周围灰质未检测到CCK-8的表达。各脑区CCK-8含量的变化趋势:前额叶皮质、黑质致密部、中脑腹侧被盖区CCK-8含量变化趋势一致,即依赖组相对盐水组明显升高（P<0.05）,戒断后有所下降,但仍高于盐水对照组;齿状回、杏仁核、蓝斑CCK-8含量变化趋势一致,即吗啡依赖后CCK-8含量相对盐水对照组显著增高（P<0.05）,戒断后进一步升高。3吗啡依赖及戒断大鼠相关脑区CCK mRNA表达的变化应用原位杂交技术检测了CCK mRNA在各组大鼠前额叶皮质、尾壳核、伏隔核、海马、杏仁核、黒质、腹侧被盖区、导水管周围灰质和蓝斑内的表达变化。结果发现,与上述CCK-8免疫阳性细胞分布基本一致,即在前额叶皮质,CCK mRNA阳性细胞主要分布于于内锥体层;在黑质,阳性细胞分布于黑质致密部;在杏仁核,阳性细胞分布于杏仁核的各亚区域;在海马结构,CCK mRNA阳性细胞较CCK-8阳性细胞数量多,也主要分布于齿状回多行细胞层,而在CA1、CA2、CA3仅有少量阳性细胞表达。中脑腹侧被盖区、蓝斑核区域也有明显的阳性表达。在尾壳核、伏隔核、中脑导水管周围灰质则未能检测到CCK mRNA的阳性表达。CCK mRNA阳性信号的变化趋势:前额叶皮质、黑质致密部、中脑腹侧被盖区CCK mRNA表达变化趋势一致,即依赖组相对盐水组明显升高（P<0.05）,戒断后有所降低,但仍高于盐水对照组;在齿状回、杏仁核、蓝斑,吗啡依赖后CCK mRNA表达相对盐水对照组显著增高（P<0.05）,戒断后进一步升高。结论:本研究证实在大鼠前额叶皮质、杏仁核、黒质、腹侧被盖区、海马、蓝斑等脑区,具有CCK-8蛋白和CCK mRNA的表达,且在吗啡依赖与戒断后表达增加;而在尾壳核、伏隔核、中脑导水管周围灰质未检测到两者的表达。说明CCK-8参与了吗啡依赖与戒断过程并具有脑区特异性。

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
英文缩写  11-12
前言  12-13
材料与方法  13-19
结果  19-22
附图  22-47
附表  47-51
讨论  51-55
结论  55-57
参考文献  57-59
综述一 CCK在阿片成瘾中的研究现状  59-69
  参考文献  65-69
综述二 与药物成瘾相关的非典型神经肽  69-83
  参考文献  77-83
致谢  83-84
个人简历  84

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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