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电离辐射诱导人乳腺癌MCF7细胞自噬性死亡相关基因的变化及机制

作　者: 宋志恒
导　师: 刘晓冬；马淑梅
学　校: 吉林大学
专　业: 放射医学
关键词: 自噬 电离辐射 DRAM TIGAR
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


自噬(autophagy)是真核细胞中所共有的通过自噬溶酶体(autophagysome)来降解胞内过多或异常蛋白以及细胞器等生物大分子,以维持正常细胞代谢功能的过程。自噬这一现象最初发现于酵母,本是一种维持细胞稳态的高度保守的进化机制。但目前很多研究发现,在缺氧、营养缺乏和电离辐射等不利因素诱导下,过度的自噬可引起自发性程序性死亡。有文献报道,电离辐射可使人乳腺癌细胞株MCF-7产生自噬泡,提示辐射可诱导肿瘤细胞发生自噬。自噬通过特定的细胞因子来调控照相应基因表达,从而引起细胞内外信号转导通路的变化。在肿瘤细胞中,传统的细胞信号通路有：(1) PI3K-I/AKT/mTOR通路、(2)PI3K-Ⅲ/Beclinl通路、(3)P53通路。其中在P53通路中,经化学药物刺激后发现DRAM与TIGAR基因对自噬起着重要的调控作用,但有关辐射诱导的乳腺癌自噬性细胞死亡过程中是否有DRAM与TIGAR基因参与,尚未见报道。本研究运用集落形成实验、MDC、RT-PCR、Real-Time PCR和Western blot等方法对照射后乳腺癌细胞MCF-7中DRAM与TIGAR基因以及其他自噬相关蛋白表达情况进行检测,以研究电离辐射作用下自噬发生中DRAM与TIGAR基因的变化及可能的作用机制为寻求肿瘤治疗新靶点提供理论依据。实验结果表明：X线照射能够诱导乳腺癌细胞株MCF-7发生自噬,可能是通过激活相关自噬通路来诱导人乳腺癌细胞株MCF-7发生自噬,同时电离辐射可以引起相关自噬基因DRAM与TIGAR的表达。以上实验结果,将为肿瘤放疗联合基因治疗研究提供依据,并为进一步的探索自噬相关通路的实验研究奠定了基础。

全文目录


内容提要  4-5
中文摘要  5-9
Abstract  9-18
第1章 前言  18-19
第2章 文献综述  19-28
  2.1 细胞自噬以及其他死亡方式  19-21
  2.2 自噬的相关分子通路及其机制  21-23
  2.3 其他影响自噬的相关分子  23-25
  2.4 电离辐射与肿瘤自噬  25-27
  2.5 本课题研究意义与创新  27-28
第3章 材料与方法  28-39
  3.1 主要试剂与器材  28-30
    3.1.1 试剂  28-29
    3.1.2 主要器材  29-30
  3.2 细胞培养与分组  30
  3.3 细胞培养试剂配制  30-31
    3.3.1 DMEM培养液  30-31
    3.3.2 小牛血清的配制  31
    3.3.3 胰酶配制  31
  3.4 细胞冻存及复苏  31
  3.5 细胞模型的建立  31-34
    3.5.1 载体扩增  31-33
    3.5.2 磷酸钙共沉淀转染方法  33
    3.5.3 脂质体转染方法  33-34
  3.6 集落形成法与MDC法  34
  3.7 REALTIME RT-PCR  34-35
  3.8 蛋白质免疫印记法(WESTERN BLOT)  35-38
    3.8.1 主要试剂的配制  35-37
    3.8.2 细胞总蛋白的提取  37
    3.8.3 蛋白浓度测定  37
    3.8.4 制胶  37
    3.8.5 方法步骤  37-38
  3.9 统计学处理  38-39
第4章 实验结果  39-54
  4.1 电离辐射诱导MCF-7细胞发生自噬  39-40
  4.2 电离辐射诱导MCF7细胞死亡机制的研究  40-42
  4.3 采用实时定量PCR法检测MCF7细胞白噬基因在自噬抑制剂3-MA与凋亡抑制剂Z-VAD处理后的变化  42-43
  4.4 电离辐射诱导MCF7细胞相关自噬蛋白表达水平  43-45
  4.5 检测MCF7细胞自噬相关蛋白在自噬抑制剂3-MA与凋亡抑制剂Z-VAD处理后的变化  45-47
  4.6 照射后MCF-7细胞基因芯片筛选辐射敏感性基因  47
  4.7 采用实时定量PCR方法检测DRAM与TIGAR基因的表达量  47-49
  4.8 电离辐射诱导MCF7细胞DRAM与TIGAR及相关自噬蛋白表达  49-51
  4.9 电离辐射对DRAM沉默细胞模型LC3蛋白的影响  51-54
第5章 讨论  54-59
第6章 结论  59-60
参考文献  60-67
作者简介及在学期间所取得的科研成果  67-68
致谢  68

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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