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越来越多的研究已经证实：生命早期的环境对胎儿、新生儿及成年个体的发育具有深远的影响。随着社会竞争的加剧,来自家庭、工作、环境的压力影响着每一个人,孕妇作为一特殊的群体,受到人们的广泛重视。孕期应激主要是抑制性应激,以焦虑和抑郁最常见,其发生率可达16.5%。人们在认识到产前应激能够影响胎儿大脑生长发育、与子代某些生理缺陷相关,可造成子代远期功能损害的同时,也注意到产前应激对子代的听觉功能有影响,但其具体机制不详。近年来,国内外均有报道长期慢性应激与脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的表达下调相关,而BDNF作为应激保护因子在应激中发挥了重要的作用,但目前尚未见产前应激中BDNF改变导致子代听觉神经系统变化的研究。神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase, NSE)是中枢神经系统特异性蛋白质,是反映神经细胞损害的最敏感指标之一,可作为神经元损伤的标志物,但产前应激中NSE是否发生了改变,这种改变是否与子代听觉功能受损有关,目前尚未见报道。同时,有研究表明在应激所致疾病的有关报道中,抗抑郁药氟西汀能够通过增加BDNF的表达,对这些疾病具有治疗和保护作用。但是,氟西汀用于治疗产前应激引起的子代听力损伤国内外尚未见报道。以往的束缚应激模型都是将应激的时间固定在规定的时间内,这样动物易产生惯性,本实验在原有束缚应激模型的基础上加以改进,将应激的时间随机分配,这样使动物模型更加完善。目的本实验所要完成的部分即为建立在改进后的产前束缚应激大鼠动物模型的基础上,用氟西汀进行干预,采用免疫组织化学技术观察子代耳蜗核组织BDNF和NSE的变化,观察产前束缚应激动物模型建立的成功与否,进一步探索产前应激对子代耳蜗核损伤的内在机制,以及氟西汀在减轻这一损伤时所产生的部分作用机理。这不仅有利于我们为孕产期社会心理保健提供理论依据,而且对于孕产期应激性疾病的预防和治疗具有重要的意义。材料与方法1 SD成年雌性大鼠36只,体重在210-250g之间。成年雄性大鼠10只,体重在270-320g之间。雌雄大鼠合笼后,以动情期发现精子满视野为妊娠第0天。雌鼠随机分为6组,即空白对照组(A组,n=6)、产前应激组(B组,n=6)、产前应激+高剂量氟西汀干预组(C组,n=6,氟西汀剂量1.2mg/kg)、产前应激+中剂量氟西汀干预组(D组,n=6,氟西汀剂量0.8mg/kg)、产前应激+低剂量氟西汀干预组(E组,n=6,氟西汀剂量0.4mg/kg)、产前应激+生理盐水对照组(F组,n=6),每组各6只。A组为正常妊娠分娩,不给予任何处理。产前应激采用束缚应激模型,在妊娠第1-14天给予束缚应激,3次/天,45分钟/次。自造模第1天起,各用药组(C、D、E组)每日在第一次束缚应激前1小时分别灌服氟西汀,灌胃容积为10ml,F组则灌服等体积的生理盐水。每组孕鼠所产仔鼠按窝别每窝随机取1-2只,每组10只,并按照母鼠相对应的分组分为OA、OB、OC、OD、OE、OF组。2各组分别观察母鼠孕期液体消耗量。3各组仔鼠(14日龄)分别于处死前测试听性脑干反应(ABR),记录ABR反应阈,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ波潜伏期及Ⅰ-Ⅱ、Ⅱ-Ⅲ、Ⅰ-Ⅲ波间期。4各组仔鼠在ABR测试完毕后处死,取脑组织,选取特定平面即耳蜗核进行切片,共取四套,一套行HE染色,一套行BDNF免疫组织化学染色,套行NSE免疫组织化学染色,另一套作为阴性对照。5应用德国Leica图像采集系统进行图像采集,Biosens Digital Imaging Systems V1.6软件(上海山富科学仪器有限公司)系统分析各组仔鼠耳蜗核BDNF和NSE免疫组织化学染色的平均光密度值。6实验数据经SPSS13.0统计软件进行统计学处理,所有数据用均数±标准差(x)表示,多组样本均数间比较用单因素方差分析ANOVA检验,两组之间比较用t检验,检验水准为α=0.05。结果1产前应激组孕鼠14天应激结束后,糖水消耗量及糖水偏爱度均明显降低,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)；氟西汀干预组孕鼠糖水消耗量及偏爱度均有提高,其中以氟西汀1.2mg/kg组提高最明显,与产前应激生理盐水对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。2产前应激组仔鼠ABR反应阈升高,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ波潜伏期及Ⅰ-Ⅱ、Ⅱ-Ⅲ、Ⅰ-Ⅱ波间期明显延长,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)；氟西汀1.2mg/kg组仔鼠ABR反应阈明显降低,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ波潜伏期及Ⅰ-Ⅱ、Ⅱ-Ⅲ、Ⅰ-Ⅲ波间期均缩短,与产前应激生理盐水对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。3产前应激组仔鼠耳蜗核HE染色可见神经元细胞明显减少,细胞肿胀,胞浆和胞核浓缩,尼氏体减少；氟西汀1.2mg/kg干预组仔鼠耳蜗核HE染色见神经元细胞数增加,细胞发育正常,各亚核细胞排列整齐,极少数胞浆和胞核出现皱缩和空泡样变。4光镜下见耳蜗核组织BDNF免疫反应物呈棕黄色,NSE免疫反应物呈棕褐色,产前应激组仔鼠耳蜗核BDNF和NSE免疫组化平均光密度值明显低于空白对照组,即BDNF和NSE表达明显减弱,差异有统计学意义(P<0.01)；氟西汀干预组仔鼠耳蜗核BDNF和NSE免疫组化平均光密度值均有增加,即BDNF和NSE表达增强,其中氟西汀1.2mg/kg和0.8mg/kg组与产前应激生理盐水对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论产前应激能够减少子代大鼠耳蜗核BDNF、NSE的表达,损伤子代大鼠耳蜗核；氟西汀可以增加产前应激大鼠子代耳蜗核BDNF、NSE的表达,对子代大鼠耳蜗核起到一定的保护作用。
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