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匹多莫德是是一种人工合成的高纯度二肽,是一种口服给药能够确知其生物利用度的免疫促进剂。其药理作用包括:激活自然杀伤细胞,促进巨噬细胞及中性粒细胞的吞噬活性,促进有丝分裂原引起的淋巴细胞增殖,促进各种细胞因子如白介素-2和γ-干扰素的分泌,从而提高细胞免疫功能。临床上匹多莫德经常和抗生素和抗病毒药物合用治疗感染性疾病,可减轻症状,减少复发。但临床上应用的匹多莫德多为口服制剂,为加快其吸收,增加其生物利用度,现将其制成注射用冻干粉针剂。为使注射用匹多莫德能够进入临床,对其免疫活性进行研究。第一部分通过测定小鼠血清溶血素抗体生成及胸腺指数和脾脏指数,研究了注射用匹多莫德对正常及免疫功能低下小鼠体液免疫和免疫器官的影响。本部分选取Balb/c小鼠60只,分别尾静脉注射低、中、高不同剂量匹多莫德,以生理盐水静脉注射为阴性对照,左旋咪唑口服为阳性对照,共给药14天。于给药第11天开始,半数小鼠腹腔注射环磷酰胺80 mg·kg-1·day-1,共4天,造成免疫抑制模型。给药第10天每只小鼠腹腔注射绵羊红细胞,给药结束后取小鼠血清,测定在补体(豚鼠血清)的作用下,小鼠血清对绵羊红细胞的半数溶血值HC50。小鼠取血后,称重,处死,取胸腺和脾脏,测定胸腺指数和脾脏指数。结果表明:对于正常小鼠,匹多莫德各剂量组的HC50分别为158.044±1.669,157.413±6.647,157.571±3.919,与生理盐水对照组(157.361±1.525)比较无显著差异,胸腺指数分别为2.469±0.267,2.527±0.260,2.590±0.277,与生理盐水对照组比较有显著差异(P<0.05, P<0.05, P<0.01),脾脏指数分别为5.355±0.779,5.774±0.466,5.690±0.676,与生理盐水对照组比较有显著差异(P<0.05, P<0.05, P<0.01);对于免疫功能低下小鼠,匹多莫德各剂量组的HC50分别为8.044±1.304,8.517±1.633,7.939±1.045,与免疫抑制模型对照组(8.517±2.361)比较无显著性差异,胸腺指数分别为1.377±0.291,1.676±0.301,1.622±0.331,其中匹多莫德中、高剂量组与免疫抑制模型组比较有显著差异(P<0.05),脾脏指数分别为3.139±0.544,3.402±0.374,3.593±0.501,其中匹多莫德中、高剂量组与免疫抑制模型组比较有显著差异(P<0.05)。因此,注射用匹多莫德对Balb/c小鼠血清溶血素形成能力没有明显的促进作用,但可提高正常和免疫功能低下Balb/c小鼠的胸腺指数和脾脏指数。第二部分采用MTT法研究注射用匹多莫德对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。本部分选取Balb/c小鼠60只,分别尾静脉注射低、中、高不同剂量匹多莫德,以生理盐水静脉注射为阴性对照,左旋咪唑口服为阳性对照,共给药14天。于给药第11天开始,半数小鼠腹腔注射环磷酰胺80 mg·kg-1·day-1,共4天,造成免疫抑制模型。于末次给药1小时后无菌取脾制成脾细胞悬液。将此悬液点入96孔板中,MTT法测定各脾细胞悬液在Con-A或LPS诱导下的增殖活性,结果以OD值表示。结果表明:在Con-A诱导下,匹多莫德低、中、高三个剂量其OD值分别为0.890±0.167,0.947±0.135,1.120±0.097,比生理盐水组(0.630±0.033)有显著提高(P<0.05, P<0.01, P<0.001)。应用环磷酰胺造成小鼠免疫功能低下模型后,匹多莫德低、中、高各剂量组的OD值分别为0.499±0.067,0.524±0.043,0.683±0.099,与免疫抑制模型对照组(0.265±0.021)比较有显著提高(P<0.001);在LPS诱导下,匹多莫德低、中、高三个剂量其OD值分别为0.545±0.044,0.542±0.064,0.714±0.106,比生理盐水组(0.319±0.021)有显著提高(P<0.001)。应用环磷酰胺造成小鼠免疫功能低下模型后,匹多莫德低、中、高各剂量组的OD值分别为0.277±0.037,0.296±0.036,0.298±0.025,与免疫抑制模型对照组(0.145±0.043)比较有显著提高(P<0.01, P<0.01, P<0.001)。因此,注射用匹多莫德能增强在Con-A和LPS诱导下正常和免疫功能低下Balb/c小鼠脾淋巴细胞的增殖能力。第三部分用中性红比色法研究注射用匹多莫德对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。本部分选取Balb/c小鼠60只,分别尾静脉注射低、中、高不同剂量匹多莫德,以生理盐水静脉注射为阴性对照,左旋咪唑口服为阳性对照,共给药14天。于给药第11天开始,半数小鼠腹腔注射环磷酰胺80 mg·kg-1·day-1,共4天,造成免疫抑制模型。末次给药后1小时,处死小鼠,取腹腔巨噬细胞制成细胞悬液,将细胞悬液加入96孔板中,酶标仪540nm处测定各小鼠巨噬细胞吞噬中性红的能力,结果以OD值表示。结果表明:匹多莫德低、中、高三个剂量组其OD值分别为0.516±0.047,0.596±0.076,0.968±0.271,其中中、高剂量组比生理盐水组(0.490±0.027)有显著提高(P<0.05, P<0.01);应用环磷酰胺造成小鼠免疫功能低下模型后,匹多莫德低、中、高各剂量组的OD值分别为0.353±0.069,0.421±0.054,0.418±0.053,与免疫抑制模型对照组(0.295±0.037)比较有显著提高(P<0.05, P<0.01, P<0.05)。因此,注射用匹多莫德可提高正常及免疫功能低下Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力。
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