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检测转基因蛋白Cry 1Ab的电化学免疫生物传感器研究

作　者: 茹柿平
导　师: 吴坚
学　校: 浙江大学
专　业: 生物系统工程
关键词: 电化学免疫生物传感器磁珠转基因蛋白Cry 1Ab 碱性磷酸酶磷酸对硝基苯酯
分类号: TP212.2;O629.73
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

近些年来,转基因农作物在给人们带来巨大贡献的同时,也带来了一系列问题,如环境问题,健康问题等。因此,迫切需要开发一些快速检测技术实现其检测。电化学免疫生物传感器发展非常迅速。相对其他方法,免疫生物传感器具有灵敏度高、检测时间短、成本低、操作简便等优点,在转基因农产品检测领域具有巨大的潜力。因此,本研究以转基因作物中常见的Cry lAb蛋白为检测对象,利用电化学免疫生物传感嚣技术实现对Cry lAb蛋白的定量检测。首先提出了一种持续动态检测免疫传感器中标记抗体的碱性磷酸酶(AP)的电化学方法。利用离子液体作为粘合剂制备碳纳米管电极(CNTs-ILE),采用安培法对酶促反应进程进行持续动态的检测。实验表明,CNTs-ILE在检测PNP时呈现出比传统商业化的玻碳电极更好的抗钝化特性。当AP浓度范围在1×10-3U/mL-1×10-1U/mL时,电流大小与AP的浓度呈良好的线性关系。该方法是一种检测AP浓度的快速方法。CNTs-ILE良好的抗钝化以及制备流程简单、材料成本低且电极表面易更新的特性,在电化学检测领域中有望得到进一步发展。接着,介绍了电化学免疫生物传感器检测转基因蛋白Cry 1Ab的过程,并将检测结果与光学法进行比较。在用电化学方法检测最终产物时,峰电流值与抗原浓度呈相关性,通过比较发现,DPV相对SWV更有优势；另一方面,与光学法比较发现,在相同的显色时间下,用光学法检测出的信号比较低,10 ppb抗原浓度下OD405仅0.1688,而用电化学方法检测,抗原浓度0.5 ppb时,已经有很明显的产物特征峰。故电化学方法比光学方法灵敏。最后,提出了基于磁珠的电化学免疫生物传感器检测转基因蛋白Cry1Ab的过程,并与未用磁珠的方法进行了比较,发现基于磁珠的电化学方法在数值上未见有明显优势。本课题从自制羧基磁珠在实验过程中分散性较差,易团聚;抗原抗体活性不理想；实验操作过程中可能出现失误这三点来分析了原因,为将来的研究者提供了一些参考。

检测转基因蛋白Cry 1Ab的电化学免疫生物传感器研究

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