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中国西部地区三种嗜神经病毒脑内感染初步流行病学研究

作　者: 冯裕星
导　师: 谢鹏
学　校: 重庆医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 尼帕病毒亨德拉病毒丙型肝炎病毒流行病学核酸检测脑组织逆转录荧光定量PCR 新疆伊犁地区
分类号: R742.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：调查尼帕病毒(Nipah virus, NiV)和亨德拉病毒(Hendra virus,HeV)在中国西部地区动物中的自然感染及流行情况,以获得我国西部地区NiV和HeV的流行病学资料,评估我国西部地区的生物安全现状。对重庆地区病原体不明的病毒性脑炎患者进行丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)正负链RNA片段检测,以研究丙型肝炎病毒与人类病毒性脑炎之间的关系,探究HCV感染在人类神经精神疾病中的作用。方法：1、2007年8月-2007年11月随机抽样采集新疆维吾尔族伊犁哈萨克自治州的伊犁河谷地区和巴音郭楞蒙古自治州巴音布鲁克草原天然牧场放养、未接种NiV疫苗的马匹新鲜脑组织183份、驴新鲜脑组织65份。研磨脑组织,应用Trizol法提取细胞总RNA。用已建立的NiV一步法实时RT-PCR检测方法,对RNA样本进行NiV检测,并提交流行病学调查报告。2、2007年8月-2007年11月随机抽样采集新疆维吾尔族伊犁哈萨克自治州的伊犁河谷地区和巴音郭楞蒙古自治州巴音布鲁克草原天然牧场放养、未接种HeV疫苗的马匹新鲜脑组织183份、驴新鲜脑组织65份。研磨脑组织,应用Trizol法提取细胞总RNA。用已建立的HeV一步法实时RT-PCR检测方法,对RNA样本进行HeV检测,并提交流行病学调查报告。3、2007年6月-2008年10月收集重庆医科大学附一院神经科的病原体不明的病毒性脑炎患者32例,每个患者抽取外周血5ml、脑脊液5ml。使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,离心分离脑脊液有核细胞,应用Trizol法提取细胞总RNA。用已建立的HCV巢式荧光定量RT-PCR检测方法,对RNA样本进行HCV正负链RNA片段检测,并提交研究报告。结果：1、NiV一步法实时RT-PCR方法能检测的NiV N基因片段的浓度范围为1.1×102-1.1×107copies/μl。该方法检测HeV N基因及BDV核蛋白基因片段结果为阴性。2、对伊犁地区收集的马脑、驴脑样本进行NiV N基因片段检测,成功进行了一步法实时RT-PCR反应,所有样本荧光扩增曲线均无Takeoff点,曲线平坦,判为阴性结果。3、HeV一步法实时RT-PCR方法能检测的HeV N基因片段的浓度范围为2.6×102-2.6×107copies/μl。该方法检测NiV N基因及BDV核蛋白基因片段结果为阴性。4、对伊犁地区收集的马脑、驴脑样本进行HeV N基因片段检测,成功进行了一步法实时RT-PCR反应,所有样本荧光扩增曲线均无Takeoff点,曲线平坦,判为阴性结果。5、HCV巢式荧光定量RT-PCR检测方法能检测的HCV正负链5’NCR基因片段的浓度范围为7.85×100-7.85×107copies/μl。该方法检测登革热病毒5’NCR基因、NiV N基因及WNV病毒E基因片段结果为阴性。6、对重庆地区收集的病原体不明的病毒性脑炎患者血液及脑脊液样本进行HCV正负链5’NCR基因片段检测,成功进行了一步法实时RT-PCR反应,脑脊液有核细胞和PBMC中HCV 5’NCR正链片段阳性的分别为1例(1/32)和2例(2/32),负链片段阳性的分别为1例(1/32)和0例(0/32)。结论：1、本课题组前期开发的尼帕病毒一步法Real-time RT-PCR方法敏感性高、特异性好,定量准确,安全快捷,适用于大规模流行病学调查和病毒性疾病检测。2、流行病学初步研究显示目前我国新疆伊犁地区部分马、驴脑组织样本中暂未检测到NiV感染。3、本课题组前期开发的亨德拉病毒一步法Real-time RT-PCR方法敏感性高、特异性好,定量准确,安全快捷,适用于大规模流行病学调查和病毒性疾病检测。4、流行病学初步研究显示目前我国新疆伊犁地区部分马、驴脑组织样本中暂未检测到HeV感染。5、本课题组前期开发的丙肝病毒巢式荧光定量RT-PCR检测方法敏感性高、特异性好,方便快捷,适用于中枢神经系统感染的快速准确检测和定量,为进一步研究HCV感染与神经精神疾病关系奠定基础。6、流行病学初步研究提示目前我国重庆地区部分病毒性脑炎患者外周血及脑脊液中均检出HCV感染,丙肝病毒感染与病毒性脑炎具有相关性。

全文目录

英汉缩略语名词对照  6-9
中文摘要  9-13
英文摘要  13-17
前言  17-21
第一部分新疆地区动物尼帕病毒脑内感染初步流行病学研究  21-38
  前言  21-22
  1 材料和方法  22-29
  2 结果  29-33
  3 讨论  33-36
  4 结论  36
  参考文献  36-38
第二部分新疆地区动物亨德拉病毒脑内感染初步流行病学研究  38-52
  前言  38
  1 材料和方法  38-43
  2 结果  43-47
  3 讨论  47-50
  4 结论  50
  参考文献  50-52
第三部分重庆地区人丙肝病毒中枢神经系统感染情况初步研究  52-73
  前言  52-53
  1 材料和方法  53-59
  2 结果  59-69
  3 讨论  69-70
  4 结论  70-71
  参考文献  71-73
全文总结  73-74
文献综述  74-86
致谢  86-88
攻读硕士学位期间发表的学术论文  88

中国西部地区三种嗜神经病毒脑内感染初步流行病学研究

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