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渥曼青霉素对人胃癌细胞的作用及机制

作　者: 秦龙
导　师: 张才全
学　校: 重庆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 胃肿瘤 NF-κB wortmannin 蛋白激酶B
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 17次
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内容摘要


目的:通过Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对人胃癌细胞SGC7901的干预,以研究经干预后SGC7901细胞增殖活性的改变及对核转录因子NF-κB表达的影响,从而探讨wortmannin对人胃癌细胞的作用及机制,以期为胃癌的临床治疗提供新的思路。方法:(1)分别采用10,30,60,90nmol/L的Akt通路抑制剂wortmannin,以3,6,12,24h不同时间对胃癌细胞SGC7901进行干预,并设置对照组运用甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制情况。(2)将60nmol/L的wortmannin作用胃癌细胞SGC7901后,分别于3,6,12,24h提取NF-κB细胞核蛋白,运用western blot法检测NF-κB核蛋白表达水平的变化。(3)将60nmol/L的wortmannin作用胃癌细胞SGC7901后,分别于3,6,12,24h提取RNA,运用RT-PCR法检测NF-κB基因的转录水平的变化。结果:(1)四种不同浓度的wortmannin均对胃癌细胞SGC7901的生长具有抑制作用;随着作用时间的延长及作用浓度的增加,与对照组相比,胃癌细胞的存活率明显下降(P<0.05);且60nmol/L的作用浓度对胃癌细胞的抑制效应与90nmol/L作用浓度的抑制效应无明显差异(P>0.05)。(2)随着wortmannin作用时间的延长,NF-κB核蛋白的表达水平均显著下降;与对照组相比,6h后其表达已下降至67%,24h后下降至21%(p<0.05)。(3)随着wortmannin作用时间的延长,NF-κBmRNA的转录表达水平亦均显著下降;与对照组相比,作用3h以后,NF-κBmRNA表达水平已下降至66%,24h后下降至5%(P<0.05)。结论:(1)wortmannin能够抑制胃癌细胞SGC7901的生长,当其作用浓度在一定范围内时,其抑制效应呈明显剂量和时间依赖性。(2)wortmannin对胃癌细胞SGC7901干预后能够下调NF-κB的核蛋白及mRNA转录的活性,且随着作用时间的延长其抑制效应更加显著。(3)wortmannin抑制胃癌细胞SGC7901的生长其机制可能是通过胃癌中存在的PI3K/Akt/NF-κB信号通路调节NF-κB的表达而发挥作用。

全文目录


英汉缩略语名词对照  6-8
中文摘要  8-10
英文摘要  10-13
前言  13-15
第一部分 人胃癌细胞SGC7901 的培养  15-17
  1. 主要器材与试剂  15-16
  2. 方法  16-17
第二部分 渥曼青霉素干预后胃癌细胞SGC7901 增殖活性的影响  17-22
  1. 材料与方法  17-18
  2. 结果  18-20
  3. 讨论  20-22
第三部分 渥曼青霉素干预后对胃癌细胞SGC7901 中NF-ΚB 核蛋白及MRNA 表达的影响  22-31
  第一节 WESTERN BLOT检测渥曼青霉素干预后胃癌细胞SGC7901NF-ΚB核蛋白表达的影响  22-27
    1. 材料与方法  22-26
    2. 结果  26-27
  第二节 RT-PCR检测渥曼青霉素干预后胃癌细胞SGC7901MRNA表达的影响  27-31
    1. 材料与方法  27-31
    2. 结果  31
第四部分 讨论  31-34
全文总结  34-35
参考文献  35-37
文献综述  37-43
致谢  43-44
攻读硕士研究生阶段发表的学术论文目录  44

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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