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氰戊菊酯和杀虫双诱导家蚕主要解毒酶和组织蛋白的变化

作　者: 吴立娜
导　师: 赵巧玲
学　校: 江苏科技大学
专　业: 特种经济动物饲养
关键词: 家蚕氰戊菊酯杀虫双解毒酶 qRT-PCR 2-DE
分类号: S884
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

近年来,由于农业害虫抗药性的不断增强,大量新型农药被广泛用于害虫防治。因桑叶污染而造成家蚕农药中毒事故时有发生,给养蚕事业的健康发展带来隐患。经研究发现,害虫产生抗药性的原因主要是解毒酶活力的提高和一些功能蛋白质的产生。为了解析家蚕在常用农药氰戊菊酯和杀虫双诱导下主要解毒酶和组织蛋白的变化情况,分别给家蚕5龄幼虫添食2种农药,采用酶活性测定和荧光定量PCR技术对主要解毒酶的活力和基因表达进行测定,使用双向电泳(2-DE)技术及ESI (electrospray ionization)质谱分析技术等对家蚕血液蛋白和中肠蛋白的差异表达进行研究。所获结果如下:(1)农药诱导下主要解毒酶的活性及解毒酶基因的相对表达采用酶活性测定的方法对羧酸酯酶(CarE)和谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)进行活力测定,发现不同组织不同时间的CarE活性在农药处理组中多数受到抑制,而不同组织GSTs活性在24h以前的农药处理组也受到抑制,24h以后得到增强;为了进一步检测这两种酶在转录水平上的表达差异,使用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)对主要解毒酶基因CarE-16和Gst-delta进行定量分析,结果显示CarE-16和Gst-delta在多种组织中都有表达,并且农药处理组不同时间的相对表达量多具有低于对照组的趋势,但脂肪体等少数组织Gst-delta的相对表达量高于对照组。(2)血液蛋白和中肠蛋白在农药诱导下的表达变化使用双向电泳(2-DE)技术及ESI (electrospray ionization)质谱技术对血液蛋白和中肠蛋白进行分离,并选取具有两次以上重复性的新增蛋白点进行检测,血液蛋白在氰戊菊酯的诱导下获得了纤维样蛋白、果糖-1,6-二磷酸醛缩酶、半胱氨酸蛋白酶抑制剂。在杀虫双诱导下获得了丝氨酸蛋白酶抑制剂-13,并且在饲喂含农药桑叶后的第三小时,两个处理组都减少了家蚕体液低分子蛋白-III的表达;而中肠蛋白只在杀虫双诱导下产生了AGAP005134-PA和核糖体蛋白S21。对所获得的蛋白进行功能分析,发现其多与免疫及抗药性相关。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-11
第1章绪论  11-18
  1.1 昆虫抗药性的研究背景  11
  1.2 昆虫抗药性的研究进展  11-17
    1.2.1 昆虫抗药性的产生原因  11
    1.2.2 影响昆虫抗药性的因素  11-12
    1.2.3 昆虫抗药性的产生机制  12-14
    1.2.4 昆虫抗药性的研究方法  14-17
  1.3 家蚕农药中毒的研究意义  17-18
第2章家蚕相关解毒酶的活力测定  18-26
  2.1 材料与方法  18-20
    2.1.1 材料及主要试剂  18
    2.1.2 方法  18-20
  2.2 结果与分析  20-24
    2.2.1 家蚕农药中毒症状  20-21
    2.2.2 羧酸酯酶(CarE)活性  21-23
    2.2.3 谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)活性  23-24
  2.3 本章小结  24-26
第3章家蚕相关解毒酶基因的定量  26-34
  3.1 材料与方法  26-28
    3.1.1 材料及试剂  26
    3.1.2 方法  26-28
  3.2 结果与分析  28-33
    3.2.1 家蚕组织总RNA 的提取质量  28
    3.2.2 CarE-16 基因的差异表达  28-31
    3.2.3 Gst-delta 基因的差异表达  31-33
  3.3 本章小结  33-34
第4章家蚕主要组织蛋白的双向电泳  34-45
  4.1 材料与方法  34-39
    4.1.1 材料、仪器与试剂  34-35
    4.1.2 方法  35-39
  4.2 结果与分析  39-43
    4.2.1 血液蛋白在农药诱导下的变化  39-42
    4.2.2 中肠蛋白在农药诱导下的变化  42-43
  4.3 本章小结  43-45
全文结论  45-46
参考文献  46-52
攻读学位期间发表的学术论文  52-53
致谢  53-54
详细摘要  54-56

氰戊菊酯和杀虫双诱导家蚕主要解毒酶和组织蛋白的变化

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