学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

cDNA-AFLP技术分离和分析荔枝胚胎发育相关基因

作　者: 谭全伟
导　师: 陈伟；王平
学　校: 福建农林大学
专　业: 植物学
关键词: 荔枝胚胎发育 cDNA-AFLP 基因 TDF
分类号: S667.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 88次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

荔枝(Litchi chinensis Sonn.)是重要的热带亚热带果树之一。荔枝胚胎发育状况决定种子的大小,直接影响果实的食用和加工品质,还与荔枝产量有密切关系。因此,开展荔枝胚胎败育的机制研究不仅为培育良种荔枝提供理论支持,而且在生产上具有实际应用价值。本研究试图通过cDNA-AFLP技术和杂交方法分离和鉴定出荔枝胚胎发育相关的基因,为今后展开荔枝胚胎发育分子机制的研究和生产上制定调控措施提供依据。本试验以胚胎发育的正常型、部分败育型和完全败育型荔枝幼胚为材料,运用cDNA-AFLP技术对3个材料的cDNA进行了差异分析。筛选出60多对引物组合,构建了荔枝胚胎发育cDNA-AFLP图谱,通过对图谱多态性片段分析,从3000多条TDFs中,挑取了60条进行了回收、测序、同源性比对分析以及杂交验证。其中31条测序成功,经BLAST比对发现有7个TDFs序列信息与其它物种的胚胎发育相关基因有较高的同源性,分别是TDF1(F3H),TDF2(AP4.3A),TDF3(CCR4-NOT),TDF26(GRP23),TDF38(磷脂酶合成酶基因),TDF45(脂酰肌醇激酶基因),TDF55(酪蛋白激酶基因)。这些基因主要与胚胎发育过程信号转导、RNA干扰现象相关。杂交结果显示,TDF1在‘乌叶’、‘兰竹’中被检测到,而TDF38仅在‘兰竹’中被检测到,这与cDNA-AFLP图谱表现一致。因此,推测荔枝胚胎发育过程中存在信号转导调控和RNA干扰调控途径,如出现异常,会导致胚胎的中途败育。

全文目录

中文摘要  7-8
ABSTRACT  8-11
第一章前言  11-29
  1 植物胚胎败育的机理研究  11-14
    1.1 雄性不育  11-12
    1.2 雌性器官发育异常  12
    1.3 胚乳发育异常  12-13
    1.4 营养供应失调  13
    1.5 内源激素、酚类物质及酶活性  13-14
  2 胚胎发育的遗传学、分子生物学及细胞生物学研究  14-16
  3 荔枝胚胎发育研究进展  16-18
  4 差异表达基因的分离方法  18-27
    4.1 mRNA 差异显示技术  18-19
    4.2 cDNA 代表性差异分析  19
    4.3 抑制消减杂交  19-20
    4.4 基因表达系列分析法  20-21
    4.5 RC4D  21
    4.6 cDNA 微列阵  21-22
    4.7 cDNA-AFLP 技术  22-25
    4.8 核酸分子杂交技术  25-27
  5 研究的目的意义及技术流程  27-29
    5.1 研究的目的意义  27-28
    5.2 研究的技术流程  28-29
第二章荔枝总RNA 的提取和cDNA 的合成  29-36
  1 试验材料  29
  2 试验方法  29-33
    2.1 荔枝胚胎总RNA 的提取  29-31
    2.2 cDNA 的合成  31-33
  3 结果与分析  33-34
    3.1 荔枝胚胎总RNA 提取  33-34
    3.2 cDNA 电泳检测  34
  4 讨论  34-36
第三章 cDNA-AFLP 体系的构建  36-47
  1 试验材料  37
  2 试验方法  37-41
    2.1 酶切及连接接头  37-38
    2.2 PCR 扩增及引物筛选  38-39
    2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析  39-41
  3 结果与分析  41-45
    3.1 酶切扩增及引物筛选  41-42
    3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳  42-45
  4 讨论  45-47
    4.1 酶切、扩增及引物筛选  45
    4.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳  45-47
第四章差异片段的分离、鉴定分析及杂交验证  47-61
  1 试验材料  47
  2 试验方法  47-53
    2.1 差异片段分离测序  47-50
    2.2 核酸分子杂交验证  50-53
  3 结果与分析  53-59
    3.1 差异条带分离纯化  53
    3.2 差异条带测序分析  53-55
    3.3 差异片段的表达情况及功能分析  55-58
    3.4 杂交结果分析  58-59
  4 讨论  59-61
    4.1 差异条带分离  59-60
    4.2 核酸杂交  60-61
第五章结论  61-63
参考文献  63-75
附录  75-79
致谢  79

cDNA-AFLP技术分离和分析荔枝胚胎发育相关基因

内容摘要

全文目录

相似论文