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不同浓度海藻糖对液氮深低温保存同种带瓣大动脉组织的保护作用及其对caspase-3表达的影响

作　者: 程晨晨
导　师: 常青
学　校: 青岛大学
专　业: 外科学
关键词: 同种瓣超低温保存海藻糖液氮 caspase-3
分类号: R318.52
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的观察海藻糖作为冷冻保护剂冻存同种带瓣大动脉组织,寻求最佳的冷冻保护剂并探讨冷冻保护剂的最佳适宜浓度以及带瓣大动脉组织caspase-3的表达。方法在液氮中冻存时间点分为12个月,15个月,18个月,依据冻存液不同分为5组,分别是：0.1mol/L DMSO(对照组),0.1mol/L海藻糖(实验组1),0.1mol/L海藻糖+0.1mol/L DMSO(实验组2),0.2mol/L海藻糖+0.1mol/L DMSO(实验组3),0.3mol/L海藻糖+0.1mol/L DMSO(实验组4)。免疫组化光镜观察组织细胞凋亡,测定血糖浓度检测组织细胞代谢情况。采用RT-PCR和Western Blot方法分别测定Caspase-3的相对表达量。新鲜组作为阴性对照。结果随着保存时间的延长,同种带瓣大动脉组织和细胞破坏逐渐加重。光镜下观察,新鲜大动脉组织均为弱阳性,各组标本与新鲜组织比较均有明显改变(d=37-43,P<0.05)。各组之间除实验组2和实验组3比较无差异外(d=66-72,P>0.05)其余各组比较均有差异(d=0-42,P<0.05),细胞凋亡最轻的是新鲜组,较好的是实验组2和实验组3,其次依次为实验组4、实验组1,凋亡最严重的是对照组。血糖测定,实验组2和实验组3无统计学意义(P=0.68>0.05),其余各组标本有显著的统计学意义(F=41-46,P<0.05),细胞代谢最旺盛的是新鲜组,较好的是实验组2和实验组3,其次依次为实验组4、实验组1,代谢最弱的是对照组。RT-PCR和Western-Blot,在每个时间点下(P<0.05),细胞凋亡最轻的是新鲜组,较好的是实验组2和实验组3,其次依次为实验组4、实验组1,凋亡最严重的是对照组。结论1、海藻糖对液氮保存带瓣大动脉有较好的保护作用;2、0.1mol/L海藻糖+0.1mol/L DMSO和0.2mol/L海藻糖+0.1mol/L DMSO联合应用,其保护效果好于0.3mol/L海藻糖+0.1mol/L DMSO以及单独使用0.1 mol /L DMSO和0.1mol/L海藻糖。3、海藻糖作为冷冻保护剂冻存同种带瓣大动脉组织,最佳的保存方案是0.1mol/L海藻糖+0.1mol/L DMSO和0.2mol/L海藻糖+0.1mol/L DMSO。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-7
引言  7-8
第一章材料和方法  8-14
  1.1 实验对象  8
    1.1.1 采用Jashari等的抗生素配方  8
    1.1.2 实验分组  8
  1.2 试剂和仪器设备  8-10
    1.2.1 主要试剂  8-9
    1.2.2 主要仪器设备  9-10
  1.3 冻存液的配置  10
  1.4 保存  10-11
  1.5 解冻及漂洗  11
  1.6 实验方法  11-13
    1.6.1 免疫组化  11-12
      1.6.1.1 免疫组化方法  11-12
      1.6.1.2 免疫组化结果判读  12
    1.6.2 糖代谢测定  12
    1.6.3 RT-PCR  12-13
    1.6.4 Western-Blot  13
  1.7 统计方法  13-14
第二章实验结果  14-21
  2.1 肉眼观察  14
  2.2 光镜观察  14-17
  2.3 糖代谢  17-18
  2.4 RT-PCR  18-19
  2.5 Western-Blot  19-21
第三章讨论  21-25
  3.1 同种带瓣大动脉组织的保存  21-22
  3.3 同种带瓣大动脉的应用  22
  3.4 同种带瓣动脉的灭菌、降温和复温  22-23
  3.5 细胞凋亡  23
  3.6 葡萄糖消耗量测定  23
  3.7 海藻糖与DMSO  23-25
结论  25-26
参考文献  26-28
文献综述  28-35
  参考文献  33-35
附录  35-36
攻读学位期间发表的论文  36-37
致谢  37-38

不同浓度海藻糖对液氮深低温保存同种带瓣大动脉组织的保护作用及其对caspase-3表达的影响

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