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朱鹮新城疫病毒的分离鉴定及其F基因的序列分析

作　者: 郑亚红
导　师: 杨增岐；王五
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 兽医
关键词: 新城疫病毒 F基因 克隆及序列分析
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 39次
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内容摘要


新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)在分类上属于副粘病毒科,禽副粘病毒属,可以引起禽类的急性、高度接触性、致死性传染病。新城疫病毒是副粘病毒科、副粘病毒亚科、禽病毒属的成员,为有囊膜的负链RNA病毒,可存在于病禽所有组织器官、体液、分泌物和排泄物中。经过多年的综合防制,我国虽已基本控制了该病的流行,但近几年ND的流行出现了新的特点,即非典型ND病例日益增多,甚至很多高抗体鸡群仍然发病,许多学者认为这些新的流行特点很可能是由毒株变异引起的。朱鹮是我国特有的濒危珍稀野生动物,本研究通过对病料的分离鉴定,得到朱鹮 NDV分离株,并对其进行致病力测定、F基因扩增和序列分析,以期为朱鹮新城疫分子流行病学提供理论依据、为其防制奠定基础。本研究通过鸡胚分离结合血清学鉴定,从来自陕西省野生动物救护饲养研究中心的发病朱鹮病料中分离鉴定出1株NDV,并用鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)、静脉致病指数等试验,对其致病力进行了研究。结果表明:朱鹮 NDV分离株为速发型强毒株,其鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)、静脉致病指数分别是:37.8、1.79、2.79。应用RT-PCR方法对NDV分离株(NDV/Crested ibis/ShX/China/2006)的F基因主要功能片段进行了扩增,产物经克隆、测序后与GenBank登录的NDV参考毒株的F基因进行核苷酸及推导氨基酸序列分析。结果表明,此分离株与参考毒株的F基因核苷酸和F蛋白氨基酸序列同源性分别为84.0%~98.7%和83.8%~96.6%;NDV/Crested ibis/ShX/China/2006分离株F蛋白的裂解位点为112R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株的分子特征;系统进化树分析表明:此分离毒株为基因Ⅶ型NDV,与近年来我国家禽中所报道的NDV的基因型相一致。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
文献综述  8-25
  第一章 新城疫病毒和新城疫疫苗的研究进展  8-25
    1.1 新城疫病毒的一般生物学特性  8-12
      1.1.1 NDV 的分类地位  8
      1.1.2 NDV 的基因组结构  8-9
      1.1.3 NDV 的形态学特征和理化特性  9
      1.1.4 NDV 的生物学特性  9-11
      1.1.5 NDV 的抗原性和基因型  11-12
    1.2 新城疫病毒的流行病学特性  12-16
      1.2.1 NDV 的宿主范围  12-13
      1.2.2 NDV 的传播途径和流行方式  13
      1.2.3 NDV 的流行现状  13-16
    1.3 ND 的诊断  16-19
      1.3.1 病原的分离与鉴定  16
      1.3.2 新城疫病毒的分离  16
      1.3.3 培养系统  16
      1.3.4 血清学检测技术  16-17
      1.3.5 现代分子生物学检测技术  17-19
    1.4 NDV 的免疫  19-21
      1.4.1 NDV 的免疫基础  19-20
      1.4.2 NDV 的体液免疫  20
      1.4.3 细胞免疫  20
      1.4.4 局部免疫  20-21
      1.4.5 被动免疫  21
    1.5 新城疫疫苗  21-25
      1.5.1 常规疫苗  21-22
      1.5.2 基因工程疫苗  22-25
实验研究  25-47
  第二章 朱鹮新城疫病毒的分离鉴定与致病性研究  25-31
    2.1 材料  25-26
      2.1.1 病料采集  25
      2.1.2 非免疫鸡胚及试验鸡  25
      2.1.3 病毒、阳性血清  25
      2.1.4 主要实验仪器、试剂和耗材  25-26
    2.2 方法  26-28
      2.2.1 NDV 的分离  26
      2.2.2 血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）  26-27
      2.2.3 致病性测定  27-28
      2.2.4 动物回归试验  28
    2.3 结果  28-29
      2.3.1 NDV 的分离鉴定  28
      2.3.2 病毒的致病性测定结果  28-29
      2.3.3 动物回归试验结果  29
    2.4 讨论  29-31
  第三章 朱鹮新城疫病毒分离株F 基因的克隆与分子遗传变异分析  31-47
    3.1 实验材料  31-32
      3.1.1 主要试验仪器  31-32
      3.1.2 主要试剂和耗材  32
      3.1.3 毒株的来源  32
      3.1.4 鸡胚、阳性血清、宿主菌与载体  32
    3.2 试验方法  32-37
      3.2.1 常用试剂的配制  32-33
      3.2.2 主要试剂  33
      3.2.3 病毒的RT-PCR 鉴定  33-34
      3.2.4 各分离毒株的核苷酸序列测定及其分子遗传变异分析  34-37
    3.3 结果与分析  37-45
      3.3.1 病毒的RT-PCR 扩增  37
      3.3.2 菌液PCR 的鉴定  37
      3.3.3 重组质粒的酶切鉴定  37-38
      3.3.4 核苷酸序列测定  38-43
      3.3.5 NDV 分离株 F 基因的分子特性分析  43-45
    3.4 讨论  45-47
结论  47-48
参考文献  48-53
附录  53-55
致谢  55-56
作者简介  56

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 家畜病毒学
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