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鸡血藤抗肿瘤活性成分的分离纯化与结构鉴定

作　者: 冯雪娇
导　师: 曹学丽
学　校: 北京工商大学
专　业: 生物化工
关键词: 鸡血藤 抗肿瘤活性 分离纯化 高速逆流色谱
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 114次
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内容摘要


鸡血藤是一种传统的中药,主要含有黄酮类、酚类、甾醇类及三萜类化合物。具有多种药理活性及临床应用,可用于治疗风湿病、贫血,还具有降血压、抑制血小板聚集、抗病毒、抗肿瘤等活性。目前国外关于鸡血藤的研究很少,国内对于鸡血藤的研究相对较多。国内对于鸡血藤的研究主要偏向于两个方面:(1)直接对鸡血藤煎剂及鸡血藤提取物的药理活性的研究。(2)对鸡血藤化学成分的研究。关于鸡血藤药理活性的物质基础研究鲜有报道。本文将鸡血藤的成分分离与其抗肿瘤活性结合起来,进行了有意义的探索。1.本文以鸡血藤饮片为原料,用80%乙醇对该原料进行热回流提取,在用MTT比色法测定该粗提物具有抗肿瘤活性的基础上。首先用乙酸乙酯、正丁醇对粗提物进行分级萃取,分别得到乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。再根据这两部分成分的极性特征,采用HSCCC法及凝胶柱层析法分别对这两部分萃取物进行分离。2.高速逆流色谱是一种新型高效的制备分离技术。本文首次将逆流色谱应用于鸡血藤成分的研究中,采用不同比例的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系,从鸡血藤80%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分分离纯化得到三种纯度较高的成分CS1～CS3。并通过液-质联用、紫外可见吸收光谱、核磁共振氢谱、碳谱及对照品对比分析等手段,鉴定出其中两种成分分别为甘草素(CS1)和刺芒柄花素(CS2),尚有一种化合物(CS3)的结构不能确定。3.关于鸡血藤成分的研究,目前的文献报道多集中在弱极性到中等极性的成分的研究,对于极性、强极性成分的研究因其分离难度较大,报道较少。本文采用亲水性色谱柱建立了鸡血藤中极性成分的高效液相色谱法分析方法。采用Sephadex LH-20凝胶柱层析法,以不同比例的甲醇-水溶液梯度洗脱从鸡血藤的正丁醇萃取物中分离得到了三种极性较强的成分CS4～CS6。并通过液-质联用、紫外可见吸收光谱、核磁共振氢谱、碳谱及对照品对比分析等手段,鉴定出其中的大豆苷(CS4),这是首次从鸡血藤中分离得到,此前只有大豆苷元的报道。4.对分离得到量比较大的甘草素、刺芒柄花素、大豆苷及尚未确定物质结构的CS6用MTT比色法进行抗肿瘤活性检测实验。结果发现甘草素对人肺癌细胞A549具有生长抑制作用,刺芒柄花素对人肺癌细胞A549具有微弱的促增殖作用,大豆苷及CS6虽然在低浓度下对人肺癌细胞A549的促增殖作用不明显,但在高浓度下表现为明显的促进增殖的作用。本课题建立的方法和取得的研究结果为鸡血藤抗肿瘤活性及其物质基础的深入研究奠定了一定的基础。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
第一章 绪论  11-23
  1.1 鸡血藤简介  11-16
    1.1.1 鸡血藤的主要成分  11-13
    1.1.2 鸡血藤的药理作用  13-15
    1.1.3 鸡血藤的临床应用  15-16
  1.2 鸡血藤化学成分研究进展  16-17
  1.3 高速逆流色谱（HSCCC）简介  17-20
    1.3.1 高速逆流色谱设计原理  18
    1.3.2 高速逆流色谱分离原理  18-19
    1.3.3 高速逆流色谱的优点  19-20
    1.3.4 高速逆流色谱在天然产物分离中的应用  20
  1.4 抗肿瘤药物筛选方法简介  20-21
    1.4.1 抗肿瘤药物筛选方法  20-21
    1.4.2 MTT 比色法筛选抗肿瘤活性药物  21
  1.5 本课题的研究目的及内容  21-23
    1.5.1 研究目的  21
    1.5.2 研究内容  21-23
第二章 鸡血藤样品预处理及分析方法的建立  23-29
  2.1 实验部分  23-25
    2.1.1 主要原料试剂  23
    2.1.2 主要仪器设备  23-24
    2.1.3 实验方法  24-25
  2.2 结果与讨论  25-28
    2.2.1 鸡血藤样品预处理  25
    2.2.2 鸡血藤80%乙醇提取物的分析  25-26
    2.2.4 乙酸乙酯萃取物的分析  26-27
    2.2.5 正丁醇萃取物及水溶物的分析  27-28
  2.3 结论  28-29
第三章 高速逆流色谱法分离纯化乙酸乙酯萃取物  29-47
  3.1 实验部分  29-31
    3.1.1 主要原料试剂  29
    3.1.2 主要仪器设备  29-30
    3.1.3 实验方法  30-31
  3.2 结果与讨论  31-45
    3.2.1 乙酸乙酯萃取物的粗分离及目标物质的确定  31-33
    3.2.2 对CS1的分离纯化及其结构的鉴定  33-38
    3.2.3 对CS2的分离纯化及其结构的鉴定  38-42
    3.2.4 对CS3的分离纯化及其结构的鉴定  42-45
  3.3 结论  45-47
第四章 凝胶柱层析法分离纯化正丁醇萃取物  47-58
  4.1 实验部分  47-49
    4.1.1 主要原料试剂  47
    4.1.2 主要仪器设备  47
    4.1.3 实验方法  47-49
  4.2 实验结果与讨论  49-57
    4.2.1 第一次柱层析分离结果及物质结构的鉴定  49-52
    4.2.2 第二次柱层析分离结果及物质结构的鉴定  52-57
  4.3 总结  57-58
第五章 MTT 比色法测定被分离物质的抗肿瘤活性  58-62
  5.1 实验部分  58-59
    5.1.1 主要原料及试剂  58
    5.1.2 主要仪器设备  58
    5.1.3 实验方法  58-59
  5.2 实验结果与讨论  59-61
    5.2.1 对照组细胞与用药组细胞生长情况分析  59-60
    5.2.2 MTT 比色法实验结果  60-61
  5.3 结论  61-62
第六章 结论、创新点与展望  62-65
  6.1 主要结论  62-64
  6.2 本论文创新点  64
  6.3 后续研究工作的展望  64-65
参考文献  65-70
附录  70-78
  附录A 物质CS1 的~1H-NMR 及~(13)C-NMR 图谱  70-72
  附录B 物质CS2 的~1H-NMR 及~(13)C-NMR 图谱  72-74
  附录C 物质CS4 的 ~1H-NMR 及 ~(13)C-NMR 图谱  74-76
  附录D 物质CS6 的 ~1H-NMR 及 ~(13)C-NMR 图谱  76-78
攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果  78-79
致谢  79

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 中草药制剂的生产
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