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褐多孔菌发酵代谢物的化学成分及抑菌活性研究

作　者: 李勇
导　师: 高锦明
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 微生物学
关键词: 褐多孔菌 液体发酵 固体发酵 抑菌活性 化学成分
分类号: Q936
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


高等真菌中含有丰富的活性物质,以其液体发酵物为资源寻找能开发成药品或农药的新的生物活性物质,已成为研究热点。褐多孔菌(Polyporus pecipes)是担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科真菌,具有抗癌,提高免疫、软化血管、预防和延缓心脏老化、抗衰老的作用。由于真菌代谢产物具有多种结构类型和生理活性,是寻找新的天然药物的重要来源,为了开发利用我国的真菌资源,寻找新的活性成分,本文以微生物发酵学、植物化学和现代化学分离理论为基础,在抑菌活性跟踪检测的前提下,利用色谱技术和现代波谱方法对其固体发酵物和发酵液乙酸乙酯提取物的化学成分进行了分离纯化及结构鉴定。其研究结果如下:1.采用活性跟踪的方法,运用植物化学的分离手段对褐多孔菌进行了化学成分研究,运用MS,IR,1 H NMR,13 C NMR,1H-1H COSY,HSQC,HMBC,NOESY等波谱技术,以及与相关文献进行对照分别对化合物的结构进行了鉴定。从褐多孔菌的固体发酵物中分离到8个化合物,鉴定出3个结构,分别为4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮麦角甾(ergosta-4,6,8( 14),22 -tetraen-3- one) (4’),2-(2’-羟基十七碳酰胺基)十八碳-1,3-二醇(2-(2’-hydroxyheptadecacosanoylamino)-1,3-diol) (4),2,4-二羟基-5-甲基-苯乙酮(2-4-Dihydroxy-5-methyl-acetophenone) (Ⅱ)。化合物3为一新的天然产物。褐多孔菌液体发酵产物的乙酸乙酯部分共分离到8个化合物,鉴定了1个化合物,其结构为2,4-二羟基-5-甲基-苯乙酮。其余化合物图谱在进一步鉴定中。2.采用生长速率法测定化合物Ⅱ对9种病原真菌菌丝体的抑制作用,结果表明化合物Ⅱ对棉花枯萎,玉米弯孢和苹果炭疽抑制效果较明显,抑制率分别为56.8%,55.6%和47.82%,最后分别得出其EC50值为86.2,62.4和63.4μg/mL。初步构效关系研究表明,羰基是保持活性的必需基团;甲基的存在对抑菌活性有一定影响;在乙酰基的甲基上引入氯原子,可使活性增强。3.HPLC法测定褐多孔菌发酵原液中化合物Ⅱ的含量为4.696μg/mL。4.体外PC12的NGF与细胞毒试验表明,化合物Ⅱ基本上无神经营养活性,但具有细胞毒活性,且与浓度呈正相关。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-11
第一章 文献综述  11-36
  1.1 高等真菌代谢产物研究进展  12-28
    1.1.1 高等真菌液体发酵培养的研究概况  12-13
    1.1.2 高等真菌化学成分的研究进展  13-22
    1.1.3 高等真菌的生物活性与药理活性研究概况  22-28
  1.2 多孔菌属真菌化学成分和生物活性研究进展  28-34
    1.2.1 多孔菌属真菌化学成分研究进展  28-33
    1.2.2 多孔菌属真菌的生物活性研究进展  33-34
  1.3 褐多孔菌研究概况  34
    1.3.1 褐多孔菌生物学特征  34
    1.3.2 褐多孔菌资源分布  34
    1.3.3 褐多孔菌药理功能  34
  1.4 立题依据及意义  34-36
第二章 材料与方法  36-46
  2.1 材料与仪器  36
  2.2 发酵培养条件  36-38
    2.2.1 固体发酵培养  36-37
    2.2.2 液体发酵培养  37-38
  2.3 发酵物的提取分离  38-41
    2.3.1 固体发酵物的提取分离  38-39
    2.3.2 液体发酵物的提取分离  39-41
  2.4 活性测试  41-42
    2.4.1 供试菌种  41-42
      2.4.1.1 供试菌种的培养基  41
      2.4.1.2 采用生长速率法  41-42
  2.5 化合物Ⅱ的神经营养活性评价  42
    2.5.1 实验材料  42
    2.5.2 实验方法  42
  2.6 MTT 比色法测定化合物Ⅱ的细胞毒活性评价  42-43
    2.6.1 材料与试剂  42-43
    2.6.2 方法  43
  2.7 HPLC 法测定褐多孔菌(Polyporus picipes)的发酵原液中化合物Ⅱ的含量 分析  43-44
    2.7.1 仪器与试剂  43
    2.7.2 色谱条件  43
    2.7.3 对照品溶液的制备  43
    2.7.4 供试品溶液的制备  43-44
    2.7.5 线性关系考察  44
    2.7.6 发酵液中化合物Ⅱ含量测定  44
  2.8 化合物Ⅱ的3 种结构类似物对7 种植物病原真菌菌丝生长的抑制作用研究  44
    2.8.1 供试菌种  44
  2.9 化合物Ⅱ衍生物的制备  44-46
    2.9.1 主要原料与试剂  44
    2.9.2 4-乙酰基-5-羟基-2-甲苯-4-溴苯酯与4-乙酰基-6-甲基-1，3-对溴苯乙酯的合成  44-46
第三章 结果与分析  46-57
  3.1 褐多孔菌的培养基及培养条件的初步筛选  46
  3.2 化合物纯度检测及结构解析  46-49
    3.2.1 化合物Ⅱ纯度检测及结构解析  46-47
    3.2.2 化合物1 纯度检测及结构解析  47-48
    3.2.3 化合物4′纯度检测及结构解析  48
    3.2.4 化合物4 纯度检测及结构解析  48-49
  3.3 抑菌活性结果  49-51
    3.3.1 褐多孔菌发酵液对植物病原菌的抑制作用  49-50
    3.3.2 化合物Ⅱ对9 种供试植物病原真菌菌丝生长的抑制作用  50-51
  3.4 化合物Ⅱ的神经营养活性测定  51
  3.5 化合物Ⅱ的细胞毒活性测定  51-52
  3.6 HPLC 法测定发酵原液中化合物Ⅱ的含量分析  52-53
  3.7 化合物Ⅱ的 3 种结构类似物对植物病原真菌菌丝体的抑制作用  53-55
  3.8 衍生物 PY-1 与 PY-2 的结构分析  55-57
第四章 问题与讨论  57-59
  4.1 菌种培养与发酵  57
  4.2 活性的测定  57-58
    4.2.1 抑菌活性的测定  57
    4.2.2 MTT 活性的测定  57-58
  4.3 化合物的结构鉴定  58
  4.4 真菌液体发酵研究的展望  58-59
第五章 结论  59-60
参考文献  60-68
附图  68-78
致谢  78-79
作者简介  79

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中图分类: > 生物科学 > 微生物学 > 微生物生物化学
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