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四型肽精氨酸转亚胺基酶在类风湿关节炎中的作用

作　者: 卢添宝
导　师: 范列英
学　校: 同济大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 类风湿关节炎 肽精氨酸转亚胺基酶 HLA-DRB1基因 共同表位 环胍氨酸肽抗体
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）以多关节损伤和各种关节外炎症表现为主要特征,是一种常见的具有较高致残性的系统性自身免疫性疾病,其确切病因和发病机制至今尚不完全清楚,但一般认为它是多种遗传因素和环境因素共同作用所导致的自身免疫性疾病。RA在自身免疫性结缔组织病中其患病率居首位,全世界的患病率大约为1%。研究表明人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）-DRB1基因的多态性与RA的易感性有密切的关系,尤其携带共同表位（shared epitope,SE）基因复合子的人有高度危险性。近来发现环胍氨酸肽（Cyclic-citrullinated peptide,CCP）抗体对RA诊断有较高的敏感性和非常高的特异性。CCP抗体在RA的早期,甚至在RA发病前几年就可被检测到,提示CCP抗体在RA的发病机制中有重要作用。肽精氨酸转亚胺基酶（Peptidylarginine deiminases,PADIs）是一族翻译后的修饰酶,能催化蛋白质中的精氨酸残基转变为胍氨酸残基。近年来的研究发现PADI4与RA的易感性有关,并且在日本人群中发现,PADI4基因多态性与RA发病的易感性有很强的相关性。本实验主要研究:（1）通过特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）技术对HLA-DRB1基因的SE表型进行分析;（2）采用ELISA法检测CCP抗体,研究CCP抗体在RA中的诊断价值,并分析CCP抗体与SE表型和RF的关系;（3）应用实时荧光定量RT-PCR技术,研究PADl4基因在RA患者的表达水平,并探讨SE表型与PADI4基因表达水平的相关性;（4）通过对PADI4基因扩增产物进行测序,研究PADI4基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）与SE表型和RA的关系。结果显示:（1）RA患者SE表型的阳性率（86.59%）明显高于对照者（54.36%）,并且RA患者SE纯合子的阳性率（49.30%）明显高于对照者（33.33%）。（2）CCP抗体的敏感性（82.93%）与RF（76.83%）无明显差别,而特异性（97.99%）显著高于RF（86.58%）。若CCP抗体同RF联合检测,则能提高RA诊断的敏感性,并且RA患者CCP抗体的出现与SE表型和RF没有关系。（3）PADI4基因在RA患者体内的表达明显高于正常人,其中表现型为SE阳性者表达显著高于SE阴性者。（4）PADI4的4个SNPs基因（padi489、padi490、padi492、padi4104）的等位基因频率存在明显差异,并且当SE表型和PADI4的少见等位基因同时出现时的基因型与其他基因型存在明显差异。以上结果提示:SE表型与RA发病有关,并且当SE表型为纯合子时,RA的易感性增加。CCP抗体是一个特异性、敏感性均佳的RA实验室诊断指标,具有广泛的临床应用前景,是一个有实际应用价值的实验诊断指标,但SE表型与CCP抗体无关。此外,我们发现PADI4基因有可能是RA的一个易感基因,它的表达量与RA的发病有相关性,SE表现型也影响PADI4基因的表达水平,并且PADI4的基因多态性与RA的易感性也有可能相关,提示我们SE表型和PADI4的基因多态性均可能在RA的发病过程中起作用。

全文目录


中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-13
第一章 前言  13-15
第二章 HLA-DRB1基因共同表位的检测  15-25
  2.1 实验材料  16
    2.1.1 研究对象  16
    2.1.2 主要试剂  16
    2.1.3 主要仪器  16
  2.2 实验方法  16-22
    2.2.1 模板DNA的制备  16-17
    2.2.2 引物的设计与合成  17-19
    2.2.3 HLA-DRB1基因共同表位的检测  19-22
  2.3 实验结果  22-23
  2.4 讨论  23-25
第三章 类风湿因子和抗环状胍氨酸肽抗体的测定  25-30
  3.1 实验材料  25-26
    3.1.1 研究对象  25-26
    3.1.2 主要试剂  26
    3.1.3 主要仪器  26
  3.2 实验方法  26-27
    3.2.1 标本的采集  26
    3.2.2 RF和CCP抗体的检测  26-27
  3.3 实验结果  27-28
  3.4 讨论  28-30
第四章 四型肽精氨酸转亚胺基酶基因表达和多态性的检测  30-42
  4.1 实验材料  32
    4.1.1 研究对象  32
    4.1.2 主要试剂  32
    4.1.3 主要仪器  32
  4.2 实验方法  32-38
    4.2.1 模板RNA的制备  32-34
    4.2.2 引物设计与合成  34
    4.2.3 荧光定量RT-PCR方法检测PADI4的表达  34-36
    4.2.4 PADI4基因多态性的检测  36-38
  4.3 实验结果  38-40
  4.4 讨论  40-42
第五章 小结  42-43
参考文献  43-47
致谢  47-48
附录一: 四型肽精氨酸转亚胺基酶(PADI4)与类风湿性关节炎的相关性  48-54
附录二: 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果  54

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病 > 自身免疫性疾病、结缔组织疾病 > 类风湿性关节炎
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