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1.探讨氨甲喋呤对映体((+)MTX、(-)MTX)对ECV304,A549, HepG2细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡实验研究。2.快速灵敏的液相色谱串联质谱法测定氨甲喋呤对映体作用HepG2后,药物在细胞内外液中的浓度。方法1.采用培养的ECV304, HepG2, A549细胞,应用MTT比色法分析MTX对映体的活性。2.用倒置显微镜观察ECV304, HepG2, A549细胞的形态学变化。3.碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测ECV304, HepG2, A549的细胞周期。4.荧光显微镜DAPI观察A549细胞的形态学变化及凋亡。5.DNA梯度电泳检测细胞凋亡。6.异硫氰酸荧光素／碘化丙啶(V-FITC／PI)双染流式细胞术检测HepG2凋亡7.液相色谱串联质谱法测定MTX对映体在细胞内外液中的浓度。结果1.在0.1,umol·L-1-150μmol·L-1范围内,(+)MTX和(-)MTX作用于ECV304, HepG2,A549细胞24、48、72h,均抑制细胞ECV304, HepG2, A549增值,但抑制强度为(+)MTX>(-)MTX。2.倒置显微镜观镜察不同浓度(+)MTX和(-)MTX作用ECV304, HepG2, A549细胞不同时间后,出现细胞不同程度的形态学改变,且(+)MTX作用的细胞形态学改变强于(-)MTX。3.(+)MTX和(-)MTX作用ECV304, HepG2和A549细胞,PI单染流式细胞术检测ECV304, HepG2, A549细胞周期的影响,表明氨甲喋呤对映体均干扰ECV304, HepG2,A549细胞DNA合成且出现不同程度的凋亡峰。4.荧光显微镜DAPI染色察不同浓度(+)MTX和(-)MTX作用A549细胞不同时间后,出现细胞不同程度的形态学改变,有凋亡小体产生。5.DNA梯度电泳检测结果发现MTX作用组有凋亡条带出现,其中(+)MTX最为明显。6.(+)MTX和(-)MTX作用HepG2细胞后,细胞出现不同程度的凋亡。7.(+)MTX和(-)MTX作用HepG2细胞后,测得(+)MTX在细胞内浓度高于(-)MTX。结论(+)MTX和(-)MTX作用ECV304, HepG2, A549细胞后,能够诱导细胞凋亡,且(+)MTX和(-)MTX对ECV304, HepG2, A549细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,(+)MTX的抗细胞增殖作用明显强于(-)MTX。
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