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两株疣孢菌次级代谢产物的研究

作　者: 吴云丹
导　师: 江红
学　校: 福建医科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 海洋 疣孢菌 次级代谢产物 细胞毒活性
分类号: R915
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：研究分离自海绵的疣孢菌FIM06054和海洋沉积物的疣孢菌FIM090395产生的次级代谢产物。方法：选择6种发酵培养基对海洋稀有放线菌FIM06054和FIM090395进行发酵，并用HPLC-DAD-MS方法对次级代谢产物进行筛选。采用HP-20大孔吸附树脂、正相硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶和C18反相柱层析等方法对次级代谢产物进行分离纯化。通过紫外光谱、质谱、核磁共振等波谱学方法对化合物进行结构鉴定。同时利用MTT法测定化合物的细胞毒活性。结果：从疣孢菌FIM06054的发酵代谢产物中分离获得化合物06054-1和06054-2，从疣孢菌FIM090395中分离获得化合物090395-1。结构鉴定研究表明06054-1和090395-1分别与抗肿瘤化合物proximicin A和B同质，而06054-2是新结构化合物，命名为3-羟基-4,7-二甲基-N-(1’,2’,3’-三羟基-3’-甲基-四氢化-吡喃-4’-基)苯甲酰胺，与烯二炔类化合物maduropetin的部分结构相似。活性研究表明06054-1对肿瘤细胞株MDA-MB-231（乳腺癌细胞）、SW620（结肠癌细胞）和CNE-2（鼻咽癌细胞）具有一定的细胞毒活性作用，其IC50值分别为80.17、46.00和55.56μM；06054-2对CNE-2具有一定的细胞毒活性作用，其IC50值为22.12μM，但对MDA-MB-231、SW620和SMMC7721的细胞毒活性作用较弱；090395-1对K562（白血病细胞）具有一定的细胞毒活性作用，其IC50值为62.20μM，对MDA-MB-231和CNE-2的细胞毒活性作用较弱。结论：实验结果表明疣孢菌的次级代谢产物中蕴藏着丰富的结构新颖的活性化合物。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-7
缩略词语  7-8
引言  8-10
第一部分 菌株的分类学研究  10-21
  1 实验材料  10-11
    1.1 主要仪器  10
    1.2 主要试剂  10-11
    1.3 实验菌株  11
  2 实验方法  11-14
    2.1 菌株形态学研究  11
    2.2 菌株 16S rRNA 基因序列分析  11-14
  3 结果与讨论  14-21
    3.1 菌株的形态及培养特征  14-17
    3.2 生理生化特征  17-18
    3.3 基于 16S rRNA 基因序列的系统发育树分析  18-19
    3.4 讨论  19-21
第二部分 疣孢菌 FIM06054 和 FIM090395 的发酵产物筛选  21-29
  1 实验材料  21-22
    1.1 主要仪器  21
    1.2 主要试剂及耗材  21-22
  2 实验方法  22-24
    2.1 琼脂斜面培养  22
    2.2 小量发酵  22-23
    2.3 小量发酵液处理流程  23
    2.4 HPLC-DAD-MS 筛选  23-24
  3 结果与讨论  24-29
    3.1 结果  24-28
    3.2 讨论  28-29
第三部分 疣孢菌 FIM06054 和 FIM090395 的发酵产物分离、纯化和结构鉴定  29-43
  1 实验材料  29-30
    1.1 主要仪器  29
    1.2 主要试剂  29-30
  2 实验方法  30-34
    2.1 扩大发酵  30
    2.2 大量发酵液处理  30
    2.3 发酵液粗品分离纯化  30-34
    2.4 化合物的结构鉴定  34
  3 结果与讨论  34-43
    3.1 化合物结构鉴定结果  34-41
    3.2 讨论  41-43
第四部分 化合物的肿瘤细胞毒活性研究  43-45
  1 实验材料  43
    1.1 主要仪器  43
    1.2 实验细胞株  43
  2 实验原理和方法  43-44
    2.1 四氮唑盐（microculture tetrozolium，MTT）还原法原理  43
    2.2 测定方法  43-44
  3 结果与讨论  44-45
    3.1 结果  44
    3.2 讨论  44-45
结语和创新点  45-46
参考文献  46-50
致谢  50-51
附图  51-58
综述  58-79
  参考文献  74-79

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药物基础科学 > 药物生物学
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