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ART1对小鼠结肠癌CT26细胞增殖的影响及其相关机制探讨

作　者: 徐剑侠
导　师: 王娅兰
学　校: 重庆医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 大肠癌 慢病毒 细胞增殖 ART1 RhoA
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：探讨精氨酸特异性腺苷二磷酸核糖基化转移酶1（Arginine-specific ADP ribosyltransferase-1，ART1）基因表达对小鼠结肠癌CT26细胞生长增殖的影响和相关机制。方法：细胞免疫荧光法检测ART1水平，以证实CT26细胞中有ART1的表达。以ART1-shRNA、 NC-shRNA(Negativecontrol-shRNA,NC-shRNA)、ART1过表达三种慢病毒颗粒感染CT26细胞，以NC-shRNA组和未转染组作为对照组。采用RT-PCR和Western blot检测四组细胞ART1mRNA和ART1蛋白的表达。细胞免疫荧光法观察四组细胞中ART1表达的差异；CCK-8（cell countingkit-8）法分析各组细胞增殖情况，流式细胞术观察各组细胞周期分布。构建小鼠结肠癌移植瘤模型，观察各组移植瘤的生长状况（体积、重量）和小鼠存活时间，Western blot检测移植瘤组织中ART1蛋白表达水平的变化。Western blot检测各组细胞及移植瘤组织中RhoA和下游因子c-myc、c-fos及COX-2蛋白的表达。结果：1.CT26细胞中有ART1的表达。2.三种慢病毒成功感染细胞，获得稳定的相应CT26细胞株。3.RT-PCR和western blot结果显示，与对照组相比，在ART1-shRNA组CT26细胞中，ART1mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.05)，而在ART1过表达组CT26细胞中显著增高(P＜0.05)，NC-shRNA组和未感染组间无明显差异(P＞0.05)。4.细胞免疫荧光结果显示，ART1在ART1-shRNA组的CT26细胞中几乎无表达，其平均荧光强度值(17.35±2.01)显著小于对照组(P＜0.05)，在ART1过表达组中有强烈的表达且高于对照组(61.41±3.51)(P＜0.05)。5. CCK8法结果显示， ART1-shRNA组中CT26细胞的增殖抑制率明显高于对照组(P＜0.05), ART1过表达组CT26细胞增殖抑制率显著低于未感染组(P＜0.05)。6.流式细胞术检测发现，与对照相比较，ART1-shRNA组CT26细胞分裂各个时期细胞百分率产生了显著的变化,G2期和S期明显降低、细胞增殖指数明显降低(P＜0.05)；ART1过表达组CT26细胞则相反，G2期和S期显著增高、细胞增殖指数显著增高(P＜0.05)。7.在动物皮下移植瘤模型中，各组移植瘤的生长状况显示，与对照组移植瘤的体积和重量数据相比较，ART1-shRNA组明显减小(P＜0.05), ART1过表达组明显增大(P＜0.05)；荷瘤小鼠存活状况结果表明，ART1-shRNA组小鼠平均存活时间较对照组明显延长(P＜0.05)，ART1过表达组明显缩短(P＜0.05)。8.移植瘤组织进行western blot检测后发现，与对照组中ART1蛋白的表达比较，ART1-shRNA组中的表达明显降低(P＜0.05)，ART1过表达组明显升高(P＜0.05)。各组细胞和移植瘤组织中RhoA、c-myc、c-fos和COX-2蛋白的western blot检测结果显示，ART1-shRNA组各因子的表达明显降低(P＜0.05)，ART1过表达组明显升高(P＜0.05)。结论：干扰和促进ART1表达分别可以抑制和促进CT26细胞增殖，提示ART1在肿瘤生长增殖过程中发挥重要作用。其机制可能与改变ART1基因表达可以影响RhoA及其下游因子c-myc、c-fos、COX-2的表达有关。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-6
摘要  6-9
ABSTRACT  9-13
前言  13-15
第一部分 ART1 对小鼠结肠癌 CT26 细胞增殖的影响  15-30
  1 材料与方法  15-21
  2 结果  21-28
  3 讨论  28-30
第二部分 ART1 对小鼠结肠癌 CT26 细胞增殖的相关机制探讨  30-36
  1 材料与方法  30-31
  2 结果  31-33
  3 讨论  33-36
全文小结  36-38
参考文献  38-43
附图  43-47
文献综述  47-55
  参考文献  50-55
致谢  55-56
攻读硕士学位期间发表的论文  56-57

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 结肠肿瘤
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