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Id1在结肠癌增殖与血管生成中的作用及可能机制研究

作　者: 于游
导　师: 张才全
学　校: 重庆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 分化抑制因子-1 结肠肿瘤 血管形成 细胞增殖 荧光定量聚合酶链反应
分类号: R735.35
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：探讨分化抑制因子-1(Id1)在结肠癌增殖与血管生成中的作用及可能机制。方法：(1)分别在体外1%O2缺氧培养结肠癌HT-29细胞0h、6h、12h、24h及36h后，利用荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）及Western blot方法检测各时点Id1的mRNA和蛋白表达情况。(2)建立Id1过表达和Id1抑表达两种结肠癌HT-29细胞系，分别在常氧和缺氧条件下培养，采用real-time PCR和Western blot方法检测HT-29细胞HIF-1α、VEGF的mRNA和蛋白表达。采集Id1过表达和Id1抑表达HT-29细胞培养上清液来培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），运用MTT实验检测HT-29细胞增殖及其培养上清对培养HUVECs体外增殖的影响。管状形成实验检测Id1过表达HT-29细胞培养上清液培养HUVECs管状形成的能力。裸鼠成瘤实验观察Id1过表达HT-29细胞的成瘤性、肿瘤新生微血管密度（MVD）及Id1在移植肿瘤组织中的表达。(3)HT-29细胞常氧培养，分为4组：Id1过表达组、Id1过表达+LY294002（PI3K/Art通路抑制剂）组、空载体组及空载体+LY294002组，采用real-time PCR和Western blot方法检测各组HIF-1α、VEGF的mRNA和蛋白表达。结果：(1)缺氧能促进HT-29细胞Id1的mRNA和蛋白表达，缺氧12h后Id1的mRNA和蛋白表达至高峰。(2)成功建立Id1过表达质粒和表达Id1-siRNA的两种结肠癌HT-29细胞系，Western blot鉴定成功。(3) real-time PCR和Western blot显示Id1过表达能显著上调HT-29细胞HIF-1α、VEGF的mRNA和蛋白表达；Id1抑表达能显著下调HT-29细胞HIF-1α、VEGF的mRNA和蛋白表达。(4)MTT实验显示Id1过表达HT-29细胞及其培养上清培养HUVECs体外增殖均明显加快；Id1抑表达HT-29细胞及其培养上清培养HUVECs体外增殖均明显减慢。(5)管状成形实验显示Id1过表达HT-29细胞培养上清培养的HUVECs管状形成能力增强，管状结构数量增加。(6)裸鼠成瘤实验显示Id1过表达HT-29细胞成瘤性增强，成瘤组织的MVD增加，Id1在成瘤组织的表达也上调。(7)LY294002能显著下调HT-29细胞HIF-1α、VEGF的mRNA和蛋白表达。结论：(1)在一定时限内，缺氧能促进结肠癌HT-29细胞Id1的mRNA和蛋白表达；(2)在结肠癌HT-29细胞中Id1为HIF-1α、VEGF的上游因子，Id1通过对HIF-1α、VEGF的正性调控促进HT-29细胞体内外增殖及HUVECs血管生成能力；(3)Id1可通过PI3K/Art信号通路对HIF-1α、VEGF的正性调控来促进结肠癌增殖及血管形成。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-12
前言  12-18
  参考文献  15-18
第一部分 缺氧对结肠癌 HT-29 细胞 Id1 表达的影响  18-34
  前言  18
  材料与方法  18-26
  实验结果  26-30
  小结  30-31
  讨论  31-32
  参考文献  32-34
第二部分 Id1 对 HIF-1α、VEGF 在结肠癌增殖及血管生成中的调控  34-72
  前言  34
  材料与方法  34-44
  实验结果  44-67
  小结  67
  讨论  67-70
  参考文献  70-72
第三部分 Id1 调控 HIF-1α、VEGF 表达机制探讨  72-83
  前言  72
  材料与方法  72-73
  实验结果  73-79
  小结  79
  讨论  79-81
  参考文献  81-83
全文总结  83-84
文献综述  84-97
  参考文献  90-97
攻读博士学位期间发表论文  97-98
致谢  98-99

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 结肠肿瘤
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