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Genistein抑制由HSV-1感染导致的人星形胶质瘤细胞增殖和凋亡异常

作　者: 王倩
导　师: 于向民
学　校: 青岛大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 人单纯疱疹病毒Ⅰ型 Genistein 人星形胶质瘤细胞 细胞增殖 细胞凋亡
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：1建立人单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus, HSV-1)感染人星形胶质瘤细胞U251模型。研究HSV-1感染对U251细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。2研究Genistein (GST)对HSV-1感染导致的U251细胞增殖和凋亡异常的抑制作用。材料和方法：1以MOI (multiplicity of infection)为5的HSV-1感染U251细胞,观察细胞形态学的改变。MTT比色法检测HSV-1感染后U251细胞增殖的变化；Guava Nexin(?) Reagent试剂盒流式细胞术检测细胞凋亡比率的变化；PI染色流式细胞仪检测细胞周期的变化。2设立GST组、GST+HSV-1组、HSV-1组和对照组,采用形态学观察、MTT比色法检测HSV-1感染后U251细胞增殖的变化。Guava Nexin(?) Reagent试剂盒流式细胞术和RT-PCR方法分别检测感染12h、24h和36h后GST (15μg/ml)组、GST+HSV-1 (15μg/ml)组、HSV-1组和对照组U251细胞凋亡比率的变化和gDmRNA的表达情况。结果：1对照组U251细胞胞体细长,突起延展充分,HSV-1组U251细胞在感染24 h后出现细胞融合；48 h后出现细胞病变效应。MTT法结果显示HSV-1组OD值始终低于对照组(P<0.05)。Annexin V/7-AAD双染流式细胞术显示HSV-1感染后12h,24 h,36 h U251细胞凋亡率高于相应对照组(P<0.05)。PI染色流式细胞仪结果显示,感染12 h,24h和36hS期细胞始终高于对照组(P<0.05)；Go/G1期细胞低于对照组(P<0.05)。24 h后,G2/M期细胞比率开始高于对照组(P<0.05)。2 MTT比色法结果显示处理组之间的差别具有高度统计学意义(F=510.743,P<0.05),并有明显的时间效应(F=2243.2,P<0.05)。15μg/ml GST+HSV-1组MTT均值高于HSV-1组均值(P<0.05)。形态学观察显示HSV-1组感染12h后出现融合,36h后出现细胞病变效应。15μg/ml GST+HSV-1组细胞感染12h后未见明显病变；24h后局部出现少量融合；36h后融合增多,但多数细胞仍为正常形态。AnnexinV/7-AAD双染流式细胞术结果显示处理组之间的差别具有高度统计学意义(F=1788.58,P<0.05),并有时间效应(F=766.478,P<0.05)。GST+HSV-1组凋亡率均低于HSV-1组(P<0.05)。RT-PCR结果显示HSV-1组在感染6h即能检测到gD mRNA的表达；GST+HSV-1组在感染12h内gD mRNA几乎不表达,24h后才出现目的条带。结论：1 U251是HSV-1的完全容许细胞。2 HSV-1感染可导致U251细胞增殖,凋亡和细胞周期的异常。3 GST能够抑制HSV-1感染所致的U251细胞增殖和凋亡的异常。4 GST能够在HSV-1感染早期抑制gD mRNA的表达。

全文目录


摘要  2-4
Abstract  4-7
第一章 HSV-1感染对人星形胶质瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响  7-27
  摘要  7-9
  引言  9
  1 材料与方法  9-13
  2 结果  13-20
  3 讨论  20-24
  参考文献  24-27
第二章 Genistein抑制由HSV-1感染导致的人星形胶质瘤细胞增殖和凋亡异常  27-47
  摘要  27-30
  引言  30
  1 材料与方法  30-35
  2 结果  35-40
  3 讨论  40-43
  参考文献  43-47
结论  47-48
文献综述 大豆异黄酮与病毒感染  48-61
  参考文献  56-61
攻读学位期间的研究成果  61-62
致谢  62-63

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 神经系肿瘤
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