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蒿鳖养阴软坚方抑制酒精性肝病大鼠肝脏细胞外基质合成的作用

作　者: 赵敏
导　师: 方步武
学　校: 天津医科大学
专　业: 药理学
关键词: 蒿鳖养阴软坚方酒精性肝病 MMP-2 MMP-9 TGF-β1 脂质过氧化物羟脯氨酸
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的研究蒿鳖养阴软坚方对大鼠酒精性肝病的预防作用并探讨其通过抑制肝脏细胞外基质的合成而抗肝纤维化的机制,从而为临床用蒿鳖养阴软坚方防治肝纤维化提供实验依据。方法取健康Wistar雄性大鼠100只,体重200-240g,采用酒精灌胃及高脂饲料、吡唑和羰基铁等建立大鼠酒精性肝病模型。将大鼠按体重随机区组分组法分为蒿鳖养阴软坚方高剂量组(高剂量组8.2g·kg-1·d-1)、蒿鳖养阴软坚方低剂量组(低剂量组2.59g·kg-1·d-1)、阳性对照药物秋水仙碱组(秋水仙碱组0.09mg·kg-1·d-1)、模型对照组(模型组酒精剂量：6.2g·kg-1·d-1)、正常对照组(正常组蒸馏水1.2ml·100-1·g-1·d-1)。方法步骤：模型组上午灌胃酒精,下午灌蒸馏水；各给药组上午灌胃酒精,下午给药；正常组上、下午均灌蒸馏水。造模10周后处死大鼠,留取标本。光镜观察肝组织病理变化；统计各组大鼠死亡率及体重；盐酸水解法检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,再换算为胶原蛋白含量；放射免疫法检测血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)含量；分光光度计法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)含量,计算球蛋白(GLOB)=TP-ALB,白/球(A/G)；荧光分光光度法检测血清丙二醛(MDA)含量；明胶酶谱法检测肝组织基质金属蛋白酶-2,-9(matrix metalloproteinases2,9, MMP-2,MMP-9)水平/活性；RT-PCR法检测肝组织TGF-β1mRNA的表达水平。结果1.死亡率及体重：模型组大鼠死亡率较正常组显著升高(P<0.01),治疗组较模型组显著降低(P<0.05)。模型组大鼠体重较正常组显著降低(P<0.01),治疗组较模型组显著升高(P<0.01)。2.肝组织病理变化：HE染色和胶原染色光学显微镜下观察,模型组大鼠肝组织出现点、灶状坏死、大量脂滴、炎细胞浸润,部分区域见轻度纤维化；治疗组见少数肝细胞肿胀、脂滴少、炎症细胞浸润轻。模型组大鼠肝组织病理分级较正常组显著升高(P<0.01),治疗组较模型组显著降低(P<0.01)。3.肝组织胶原蛋白含量：模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量较正常组显著升高(P<0.01),治疗组较模型组显著降低(P<0.05)。4.血清肝纤维化指标检测：各组大鼠血清PCⅢ、Ⅳ-C、HA和LN含量差异无统计学意义(P>0.05)。5.肝功能指标检测：模型组大鼠血清ALT、AST和GLOB含量较正常组显著升高(P<0.01),治疗组较模型组显著降低(P<0.01);模型组大鼠血清ALB含量和A/G较正常组显著降低(P<0.01),治疗组较模型组显著升高(P<0.01)；各组之间总蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。6.血清MDA含量：模型组大鼠血清MDA含量较正常组显著升高(P<0.01),治疗组较模型组显著降低(P<0.01)。7.肝组织MMP-2、MMP-9的水平/活性：模型组大鼠肝组织MMP-2和MMP-9水解条带的亮度和面积较正组显著升高(P<0.01)；治疗组较模型组显著降低(P<0.01)。8.肝组织TGF-β1mRNA表达：模型组大鼠肝组织TGF-β1mRNA表达水平较正常组显著升高(P<0.05);治疗组肝组织TGF-β1mRNA表达水平较模型组显著降低(P<0.05)；各个治疗组之间无显著差异。结论1.大鼠酒精性肝病模型造模成功。2.蒿鳖养阴软坚方对大鼠酒精性肝病有预防作用。3.其部分作用机制包括通过保护肝细胞、抗脂质过氧化损伤、降低MMP-2和MMP-9的水平/活性、抑制TGF-β1mRNA的表达而抑制肝脏细胞外基质的合成而产生抗肝纤维代的作用。

蒿鳖养阴软坚方抑制酒精性肝病大鼠肝脏细胞外基质合成的作用

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