学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

草酸诱导金铁锁悬浮培养细胞程序化死亡的机制

作　者: 李岩
导　师: 张宗申
学　校: 大连工业大学
专　业: 发酵工程
关键词: 草酸程序化死亡线粒体细胞核胞内酸碱度 K+通道 Ca2+通道信号转导
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 3次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本文以金铁锁（psammosilene tunicoides）悬浮培养细胞为材料，研究外源草酸引起细胞死亡的性质和机理，并且讨论分析了与之相关的信号转导问题。通过Fluorescein diacetate（FDA）-Evans blue染色，我们发现外源草酸导致了大量细胞死亡，并且死亡的细胞均出现了胞质浓缩、大量空泡等程序化死亡的明显特征。线粒体和细胞核是控制细胞生命活动最重要的两种细胞器，我们通过Rhodamine123（Rd123）和Propidum lodide（PI）分别对其染色，发现草酸处理导致了线粒体膜电位势塌陷和核膜完整性的破坏，而线粒体膜电位势（Ψm）的塌陷被普遍认为是启动程序化死亡的早期事件。通过2’,7’-bis-（2-carboxyethyl）-5-（and-6）-carboxyfluorescein, acetoxymethyl ester（BCECF-AM）染色标记胞内的酸碱度，我们发现经草酸处理后产生的胞内酸化表现出与程序化死亡类似的草酸浓度依赖性，即0.01mmol/L的草酸几乎对胞内的酸碱度没有太大影响，也对细胞成活率影响不大；0.1mmol/L的草酸使胞内出现一定程度的酸化，部分细胞出现了程序化死亡现象；1mmol/L的草酸使胞内严重酸化，几乎绝大部分细胞出现程序化死亡现象。而在添加Ca²⁺螯合剂EGTA和Ca²⁺通道阻断剂La³⁺后依然存在这一现象。为了进一步证明草酸致使细胞发生程序化死亡与胞内酸化的关系，分别添加了可以使胞内产生暂时酸化的外源NH4Cl和使胞内碱化的Fusicoccin （FC），发现前者导致了细胞发生一部分死亡，后者减弱草酸引起的胞内酸化并且减少细胞发生程序化死亡的几率。采用膜片钳技术发现草酸抑制了细胞膜上的内向K⁺通道，激活了内向Ca²⁺通道，而经H⁺-ATPase的激活剂FC处理后，草酸对上述两种通道的作用均受到减弱。上述结果提示，草酸可能通过使胞内酸化导致了细胞程序化死亡，并且抑制内向K⁺通道、活化内向Ca²⁺通道，这些作用可能与草酸调节了H⁺-ATPase活性有关。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章绪论  9-17
  1.1 草酸的生理作用及研究概况  9-13
    1.1.1 参与胞内酸碱度及渗透的调节  9
    1.1.2 参与 Ca~(2+)等胞内离子浓度的调节  9-10
    1.1.3 增强植物的抗性  10-11
    1.1.4 植物草酸代谢及其调控  11-13
  1.2 金铁锁的分布及研究概况  13-14
    1.2.1 金铁锁简介  13
    1.2.2 研究水平及当前国内外研究动态  13-14
  1.3 植物的程序化死亡  14-15
    1.3.1 程序化死亡的特征  14-15
    1.3.2 程序化死亡的研究意义  15
  1.4 膜片钳技术  15-17
    1.4.1 膜片钳技术的基本原理  15-16
    1.4.2 膜片钳技术的记录方式  16
    1.4.3 膜片钳技术与其它技术的结合  16-17
第二章材料和方法  17-22
  2.1 实验材料  17
  2.2 主要仪器及试剂  17
  2.3 试验方法  17-22
    2.3.1 金铁锁悬浮体系的建立  17
    2.3.2 细胞活力的测定  17-18
    2.3.3 外源草酸对金铁锁悬浮细胞的影响  18
      2.3.3.1 不同浓度的外源草酸对金铁锁悬浮细胞的影响  18
      2.3.3.2 外源草酸对金铁锁悬浮细胞细胞器的影响  18
    2.3.4 外源草酸对金铁锁悬浮细胞胞内酸碱度和程序化死亡的影响  18-19
      2.3.4.1 不同浓度外源草酸对金铁锁悬浮细胞内酸碱度的影响  18-19
      2.3.4.2 金铁锁悬浮细胞胞内酸性对程序化死亡的影响  19
      2.3.4.3 金铁锁悬浮细胞胞内碱性对程序化死亡的影响  19
    2.3.5 EGTA 和 La~(3+)对金铁锁悬浮细胞内酸碱度的影响  19-20
    2.3.6 膜片钳部分  20-22
      2.3.6.1 金铁锁原生质体的制备  20
      2.3.6.2 金铁锁原生质体细胞膜上电流的测量  20-22
第三章结果与讨论  22-34
  3.1 外源草酸对金铁锁悬浮细胞的影响  22-26
    3.1.1 不同浓度的外源草酸对金铁锁悬浮细胞的影响  22-24
    3.1.2 外源草酸对金铁锁悬浮细胞细胞器的影响  24-26
  3.2 外源草酸对金铁锁悬浮细胞胞内酸碱度和程序化死亡的影响  26-29
    3.2.1 不同浓度外源草酸对金铁锁悬浮细胞内酸碱度的影响  26-28
    3.2.2 金铁锁悬浮细胞胞内酸性对程序化死亡的影响  28-29
  3.3 EGTA 和 La~(3+)对金铁锁悬浮细胞内酸碱度的影响  29
  3.4 膜片钳部分  29-34
    3.4.1 外源草酸对金铁锁悬浮细胞 K~+通道的影响  29-31
    3.4.2 外源草酸对金铁锁悬浮细胞 Ca~(2+)通道的影响  31-34
第四章结论  34-36
参考文献  36-40
致谢  40

草酸诱导金铁锁悬浮培养细胞程序化死亡的机制

内容摘要

全文目录

相似论文