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粘帚霉UN7-108选育及室内药效研究

作　者: 刘颖
导　师: 刘均洪
学　校: 青岛科技大学
专　业: 药物化学
关键词: 粉红粘帚霉菌 灰霉菌 生物防治 诱变
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


由灰葡萄孢引起的灰霉病是一种世界性病害,可引起植物花、茎的萎缩以及种子腐烂,能够引发多种作物发病,尤其对于草莓的危害较为严重。粉红粘帚霉(Gliocladium)作为一类植物病原性生防菌被广泛应用。但由于其野生型菌株产孢量低、抑菌效果较差等原因,目前尚无法进入工业化阶段。本文对粉红粘帚霉菌UN7-108进行紫外、温度、亚硝酸钠单因素诱变及温度-亚硝酸钠复合诱变选育,并确定各种诱变的最佳诱变条件。对获得的菌株进行生物学特性及抑菌性实验研究,评价其生防性能。对筛选出的菌株进行室内药效评价,为大田试验做准备。实验得出：紫外诱变120s；温度诱变4min亚硝酸钠12min；温度-亚硝酸钠复合诱变先温度诱变4min,再亚硝酸钠处理12min。通过产孢量初筛、抑菌活性复筛,筛选得到了4株诱变菌株UV-3、TR-3、NS-1和TN-1；产孢量分别提高2.47倍、2.20倍、1.89倍和2.20倍,且遗传性状稳定、生物学性状和抑菌效果均优于原始菌株。紫外诱变菌株UV-3,各方面性状均优于其它诱变菌株。对原菌株及诱变菌株UV-3进行室内药效实验,得出：粉红粘帚霉菌的抑菌活性随其孢子浓度的增大而增强,UV-3的抑菌活性优于原菌；1×107个/mL孢子浓度时,UV-3的萌发抑制率达81%、菌丝抑制率达93%、预防率达96%；1×106个/mL孢子浓度时,UV-3的萌发抑制率达58%、菌丝抑制率达90%、预防率达93%、高于此浓度无显著差异。因此,106个/ml孢子浓度的紫外诱变菌株UV-3的室内药效效果较理想。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-11
第一章 前言  11-26
  1.1 引言  11-12
  1.2 灰霉病及危害  12-14
    1.2.1 灰霉菌简介  12
    1.2.2 草莓灰霉病症状  12
    1.2.3 草莓灰霉病防治  12-14
      1.2.3.1 农业措施  12-13
      1.2.3.2 化学防治  13
      1.2.3.3 生物防治  13-14
      1.2.3.4 生态防治  14
  1.3 粉红粘帚霉  14-17
    1.3.1 粘帚霉简介  14
    1.3.2 粉红粘帚霉的生物学特性  14-15
    1.3.3 粉红粘帚霉的生防机制  15-16
      1.3.3.1 竞争作用  15
      1.3.3.2 重寄生作用  15
      1.3.3.3 溶菌作用  15-16
      1.3.3.4 抗生作用  16
    1.3.4 粉红粘帚霉的防治现状  16-17
  1.4 微生物菌种选育  17-21
    1.4.1 诱变方法  18-20
      1.4.1.1 紫外诱变  18
      1.4.1.2 超声波诱变  18-19
      1.4.1.3 温度诱变  19
      1.4.1.4 亚硝酸诱变  19
      1.4.1.5 复合诱变  19-20
      1.4.1.6 其他诱变  20
    1.4.2 诱变育种的原则  20-21
  1.5 室内药效  21-24
    1.5.1 平皿法  22
    1.5.2 叶片法  22-23
    1.5.3 盆栽法  23
    1.5.4 凹玻片法  23-24
  1.6 本论文的研究内容和意义  24-26
第二章 粉红粘帚霉UN_7-108的诱变选育  26-46
  2.1 实验材料  26-28
    2.1.1 供试菌种及来源  26
    2.1.2 主要仪器与生产厂家  26-27
    2.1.3 试剂与生产厂家  27
    2.1.4 常用试剂的配制  27-28
    2.1.5 培养基  28
  2.2 实验方法  28-34
    2.2.1 菌种活化  28
    2.2.2 菌种培养  28-29
      2.2.2.1 点接种法  28-29
      2.2.2.2 液体表面密集接种法  29
    2.2.3 菌种保藏  29-30
      2.2.3.1 液体石蜡EP管保藏法  29
      2.2.3.2 斜面保藏法  29
      2.2.3.3 沙土管保藏法  29-30
    2.2.4 孢子悬液的制备  30
      2.2.4.1 打孔器切取菌饼制备孢子悬液  30
      2.2.4.2 接种针刮菌丝制备孢子悬液  30
    2.2.5 平板产孢量测定  30-31
    2.2.6 粉红粘帚霉的诱变选育  31-32
      2.2.6.1 出发菌株的筛选  31
      2.2.6.2 孢子悬液的制备  31
      2.2.6.3 紫外诱变  31
      2.2.6.4 温度诱变  31
      2.2.6.5 亚硝酸钠诱变  31-32
      2.2.6.6 超声波诱变  32
      2.2.6.7 温度-亚硝酸钠复合诱变  32
    2.2.7 诱变致死率和正突变率的计算  32-33
    2.2.8 高活性菌株的筛选  33-34
      2.2.8.1 初筛  33
      2.2.8.2 复筛  33-34
    2.2.9 诱变菌株的遗传稳定性检测  34
  2.3 实验结果与分析  34-44
    2.3.1 紫外诱变结果  34-36
      2.3.1.1 紫外诱变致死率  34-35
      2.3.1.2 紫外诱变突变率  35-36
    2.3.2 温度诱变结果  36-37
      2.3.2.1 温度诱变致死率  36
      2.3.2.2 温度诱变突变率  36-37
    2.3.3 超声波诱变结果  37-38
      2.3.3.1 超声波诱变致死率  37-38
      2.3.3.2 超声波诱变突变率  38
    2.3.4 亚硝酸钠诱变结果  38-40
      2.3.4.1 亚硝酸钠诱变致死率  38-39
      2.3.4.2 亚硝酸钠诱变突变率  39-40
    2.3.5 温度-亚硝酸钠复合诱变结果  40
    2.3.6 不同诱变所得诱变菌株的复筛  40-44
      2.3.6.1 紫外诱变菌株的复筛  40-41
      2.3.6.2 温度诱变菌株的复筛  41-42
      2.3.6.3 亚硝酸钠诱变菌株的复筛  42-43
      2.3.6.4 温度-亚硝酸钠诱变菌株的复筛  43-44
    2.3.7 突变菌株的遗传稳定性  44
  2.4 本章小结  44-46
第三章 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株的生物特性比较  46-58
  3.1 实验材料  46-47
    3.1.1 供试菌株及来源  46-47
    3.1.2 主要仪器与生产厂家  47
    3.1.3 主要试剂、原料与生产厂家  47
    3.1.4 0.1%吐温80-蒸馏水的配制方法  47
    3.1.5 培养基的制备  47
      3.1.5.1 马铃薯葡萄糖固体培养基(PDA)的制备  47
      3.1.5.2 马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)的制备  47
  3.2 实验方法  47-49
    3.2.1 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株菌落形态比较  47
    3.2.2 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株菌落生长比较  47-48
    3.2.3 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株菌丝生物产量比较  48
    3.2.4 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株产孢量比较  48
    3.2.5 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株产孢曲线比较  48-49
    3.2.6 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株孢子萌发率比较  49
  3.3 结果与分析  49-56
    3.3.1 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株菌落形态比较  49-50
    3.3.2 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株菌落生长比较  50-51
    3.3.3 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株菌丝生物产量比较  51-53
    3.3.4 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株产孢量比较  53
    3.3.5 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株产孢曲线比较  53-55
    3.3.6 粉红粘帚霉原始菌株与诱变菌株孢子萌发率比较  55-56
  3.4 本章小结  56-58
第四章 粉红粘帚霉室内药效研究  58-70
  4.1 实验材料  58-59
    4.1.1 供试菌株及来源  58
    4.1.2 主要仪器与生产厂家  58-59
    4.1.3 主要试剂、原料与生产厂家  59
    4.1.4 培养基的制备  59
    4.1.5 0.1%吐温80-蒸馏水的配制方法  59
  4.2 实验方法  59-62
    4.2.1 抑制病原菌菌丝生长实验  59-60
    4.2.2 抑制病原菌孢子萌发实验  60-61
      4.2.2.1 病原菌孢子悬液的制备  60
      4.2.2.2 抑制病原菌孢子萌发  60-61
    4.2.3 土豆片法进行室内药效研究  61-62
  4.3 结果与分析  62-68
    4.3.1 抑制病原菌菌丝生长实验  62-63
    4.3.2 抑制病原菌孢子萌发实验  63-66
    4.3.3 采用土豆片法的室内药效研究  66-68
  4.4 本章小结  68-70
全文结论  70-72
参考文献  72-76
致谢  76-77
攻读学位期间发表的学术论文目录  77-78

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 各种防治方法 > 生物防治
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