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苎麻根腐线虫发生动态的研究

作　者: 赵宁
导　师: 张德咏
学　校: 中南大学
专　业: 植物病理学
关键词: 苎麻咖啡短体线虫 rDNA-ITS-PCR 致病性种群动态
分类号: S435.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

摘要：苎麻是中国特有的纤维作物,是重要的纺织工业原料,主要分布于湖南省、湖北省、四川省、重庆市和江西省等地区。然而,许多限制因素影响着苎麻生产；根腐线虫病是苎麻生产上的主要病害之一,严重损害苎麻生长,导致纤维质量下降,限制苎麻产业的可持续发展。因此在苎麻种植区为控制这种疾病亟需建立病害综合管理方法。但由于国内外相关研究较少造成其研究困难,本文从我国苎麻主产区采集了根腐线虫样品,对其病原进行了鉴定,并研究了其种群亲缘关系、致病力差异和种群动态规律。本文的主要结论如下：(1)从湖南沅江(HN-1)、江西宜春(JX-2)、湖北咸宁(HB-3)、四川达州(SC-4)等国内苎麻主产区采集了苎麻根腐线虫病样品,利用形态学和分子生物学技术鉴定其病原均为咖啡短体线虫(Pratylenchus.coffeae)。聚类分析结果显示JX-2、HB-3、SC-4等3个地区的苎麻根腐线虫同源性高达100%属于同一个分支,而湖南沅江苎麻根腐线虫种群(HN-1)与中国湖北种群(HM469441)的咖啡短体线虫的同源性达91%,属于另一分支。(2)以胡萝卜愈伤组织离体培养的根腐线虫为样本,测试了其对苎麻的致病力,结果表明离体培养的根腐线虫对苎麻有着一定的致病力,且随着接虫数量的增加,危害也加重。(3)以湖南沅江为试验点,研究了苎麻根腐线虫病害的发生流行规律。结果显示：在一年中苎麻根腐线虫种群数量随时间的变化发生明显的波动,以全年不同时间的线虫密度来看,春、夏季线虫密度较大,秋、冬季线虫密度较小,出现三个高峰期；全年苎麻根腐线虫种群密度在土壤中的垂直分布有着一定的规律性,0～10cm土层线虫分布最少,21～30cm土层线虫分布最多,随着土层的加深,线虫种群密度逐渐增加。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
第一章文献综述  10-21
  1 苎麻寄生线虫  10-16
    1.1 作物寄生线虫  10-11
    1.2 苎麻根腐线虫病的病原  11
    1.3 苎麻根腐线虫病害的症状与诊断  11-12
    1.4 短体线虫的分类鉴定  12-15
      1.4.1 短体线虫的形态鉴定  12
      1.4.2 短体线虫的分子鉴定  12-15
    1.5 短体线虫的致病性  15
    1.6 短体线虫的种群动态规律  15-16
    1.7 短体线虫的生物学特性  16
  2 短体线虫的防治  16-19
    2.1 化学防治  17
    2.2 生物防治  17-18
    2.3 分子生物学防治技术  18-19
  3 本研究的目的和意义  19-21
第二章苎麻根腐线虫病的病原鉴定  21-38
  1 材料和方法  21-26
    1.1 材料  21
    1.2 线虫的分离  21
    1.3 病原线虫的形态鉴定  21-22
      1.3.1 病原线虫的杀死和固定  21
      1.3.2 病原线虫的制片  21-22
      1.3.3 病原线虫的形态显微观察和测量特征值  22
    1.4 病原线虫的分子鉴定  22-26
      1.4.1 单条线虫DNA的提取  22
      1.4.2 线虫rDNA-ITS区的PCR扩增  22-23
      1.4.3 电泳检测、PCR产物的克隆  23-26
        1.4.3.1 电泳检测  23
        1.4.3.2 回收PCR产物  23
        1.4.3.3 感受态细胞的制备  23-24
        1.4.3.4 DNA产物的连接  24
        1.4.3.5 DNA产物的转化  24
        1.4.3.6 重组质粒的PCR筛选  24-25
        1.4.3.7 碱裂解法提取质粒  25
        1.4.3.8 重组质粒的PCR鉴定  25
        1.4.3.9 重组质粒酶切鉴定  25
        1.4.3.10 目的片段序列测定及序列同源性分析  25-26
  2 结果与分析  26-36
    2.1 病原线虫的形态鉴定  26-29
    2.2 病原线虫的分子鉴定结果  29-36
  3 结果与讨论  36-38
第三章苎麻根腐线虫致病性研究  38-43
  1 材料和方法  38-39
    1.1 供试材料  38
    1.2 致病性试验方法  38-39
      1.2.1 根腐线虫的培养  38-39
      1.2.2 寄主植物的处理  39
      1.2.3 试验虫源的准备  39
      1.2.4 接种  39
      1.2.5 结果检查  39
  2 结果与分析  39-41
  3 结果与讨论  41-43
第四章苎麻根腐线虫土壤动态分布调查  43-46
  1 材料和方法  43
    1.1 样本采集时间和地点  43
    1.2 样本的采集方法  43
    1.3 样本的处理  43
  2 结果与分析  43-45
    2.1 苎麻根腐线虫种群密度时间分布动态  43-44
    2.2 苎麻根腐线虫种群密度在土壤中的垂直分布动态  44-45
  3 结果与讨论  45-46
第五章全文总结  46-47
参考文献  47-53
附录A 论文所用重要缩写词及中文全称  53-54
附录B 常用缓冲液及培养基配方  54-56
附录C 常用生化试剂及仪器  56-58
攻读学位期间主要研究成果  58-59
致谢  59

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