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生防丛枝菌根真菌的发掘及在烟草上的应用研究初探

作　者: 王婷婷
导　师: 郭坚华
学　校: 南京农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 丛枝菌根(AM)真菌生物防治烟草青枯病多样性变性梯度凝胶电泳(DGGE)
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

贵州省位于我国西南地区,地形复杂多样,具有典型的喀斯特地貌,是我国主要的烟草种植区之一。本研究收集了该省主要烟草产地的烟草根围土样,湿筛离心法分离丛枝菌根(AM)真菌孢子,采用形态学方法,共鉴定出4属20种AM真菌；同时,利用巢氏PCR—变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对AM真菌群落多样性进行了分析,对图谱中55条主要条带进行了回收和测序。研究结果表明,DGGE图谱中55个优势条带的基因序列中有31个基因序列与GenBank中登录的相关序列的相似性为100%,22个基因序列的相似性在95%以上。土壤中AM真菌主要为球囊霉属(Glomus)真菌,这与形态学方法鉴定所得结果一致。温室实验中,对分离得到的AM真菌的促生和防效作用进行了统计,结果表明,三种AM真菌,明球囊霉(Glomus clarum)、毛氏无梗囊霉(Acaulospora morriwae)、极大巨孢囊霉(Gigaspora gigantea)对烟草具有明显的生防效果,烟草根长、株高、鲜重等指标显著高于对照,且它们对烟草青枯病的防效都在50%以上。这些结果为进一步研究贵州地区AM真菌多样性以及AM真菌资源的应用开发提供了依据。1.贵州烟草根围AM真菌多样性的初步研究从贵州省内不同烟草产地采集烟草根际土样,湿筛离心法分离(AM)真菌孢子,共鉴定出烟草AM真菌4属20种。其中球囊霉属(Glomus)9种,无梗囊霉属(Acaulospora)7种,巨孢囊霉属(Gigaspora)3种,盾巨孢囊霉属(Scutellospora)1种。实验提取土壤DNA样品,扩增AM真菌特异性片段,并采用PCR-DGGE技术对AM真菌多样性进行了分析。对DGGE图谱中55条优势条带测序结果显示,烟草根际土壤中AM真菌主要为球囊霉属(Glomus)真菌,这与形态学方法鉴定的结果一致,实验为进一步研究贵州烟草AM真菌多样性提供了依据。2.AM真菌对烟草青枯病的生防效果研究实验研究了AM真菌对烟草生长及其对烟草青枯病的防治效果,得到了分离于贵州烟草根围、并对烟草有促生和防病效果的几种AM真菌。温室实验中,对AM真菌的促生和防效作用进行了统计,结果表明,明球囊霉(G. clarum)、毛氏无梗囊霉(A.morriwae)、极大巨孢球囊霉(G. gigantea)三种AM真菌对烟草具有明显的生防效果,烟草根长、株高、鲜重等指标显著高于对照,且它们对烟草青枯病的防效都在50%以上。实验筛选出了几种对烟草具有较好促生和防病作用的AM真菌,为AM真菌资源的应用开发提供了依据。

全文目录

摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
第一章丛枝菌根真菌的分类及研究方法  11-27
  1 丛枝菌根(AM)真菌的概念及分类特征  11-15
    1.1 AM真菌的概念  11
    1.2 AM真菌分类特征  11-15
  2 AM真菌的研究方法  15-20
    2.1 AM真菌的分类鉴定  15-16
    2.2 AM真菌的培养  16-20
  3 现代分子生物学方法在AM真菌研究中的应用  20-27
    3.1 分子标记鉴定技术  21-22
    3.2 巢式PCR(Nested PCR)鉴定技术  22
    3.3 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR)鉴定技术  22
    3.4 SSCP(Single-strand conformation polymorphism)鉴定技术  22-23
    3.5 T/RFLP末端/限制性片段长度多态性鉴定技术  23
    3.6 随机扩增多态性DNA(RAPD)鉴定技术  23-24
    3.7 变性梯度凝胶电泳/温度梯度凝胶电泳(DGGE/TTGE)鉴定技术  24
    3.8 环介导等温扩增反应(LAMP)鉴定技术  24-27
第二章菌根真菌对植物的有益作用  27-35
  1 丛枝菌根(AM)真菌的应用  27-30
    1.1 AM真菌在农业中的应用  27-29
    1.2 AM真菌在林业中的应用  29-30
  2 丛枝菌根真菌提高植物抗病性的机制  30-35
    2.1 改善植物营养  30-32
    2.2 与病原物竞争光合产物和侵染位点  32
    2.3 诱导信号物质和生化拮抗物质产生  32-35
第三章贵州烟草根围AM真菌多样性的初步研究  35-45
  摘要  35
  ABSTRACT  35-36
  1 材料与方法  36-38
    1.1 土壤样品采集  36
    1.2 真菌孢子分离  36-37
    1.3 真菌特异性片段巢式PCR扩增  37
    1.4 DGGE分析AM真菌多样性  37
    1.5 DGGE条带测序结果分析  37-38
    1.6 数据分析  38
  2 结果与分析  38-44
    2.1 贵州烟草根围的AM真菌鉴定结果  38-40
    2.2 贵州烟草根围AM真菌的多样性分析结果  40-42
    2.3 AM真菌18S rRNA基因测序结果分析  42-44
  3 讨论  44-45
第四章 AM真菌对烟草青枯病的生防效果研究  45-55
  摘要  45
  ABSTRACT  45-46
  1 材料与方法  46-48
    1.1 植物、病原物的制备  46-47
    1.2 碱解离-酸性品红法测定根系侵染率  47
    1.3 AM真菌对青枯病的防效实验  47-48
    1.4 AM真菌对烟草的促生实验  48
    1.5 数据分析  48
  2 结果与分析  48-52
    2.1 AM真菌侵染率测定结果  48-49
    2.2 AM真菌对烟草青枯病的防治效果  49-51
    2.3 AM真菌的促生实验结果  51-52
  3 讨论  52-55
参考文献  55-67
攻读学位期间完成的学术论文  67-69
致谢  69

生防丛枝菌根真菌的发掘及在烟草上的应用研究初探

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