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辽宁碱蓬白腐病病原菌生物学特性及2株内生菌生物活性的研究

作　者: 任伟重
导　师: 姜华
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 微生物
关键词: 碱蓬 白腐病 内生菌 植物促生作用
分类号: S432.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


本文对大连地区辽宁碱蓬上发生的白腐病病原菌进行了形态学及分子生物学鉴定,进一步对其病原菌进行了生物学特性研究。同时,对从辽宁碱蓬中分离出来的2株内生菌进行了抑菌试验及对植物促生作用的研究,其主要研究结果如下：1、从辽宁碱蓬发生的白腐病病斑上单斑分离出2株真菌UN-X1和UN-X2,依据形态学鉴定和分子生物学鉴定结果,2株真菌均属链格孢属Alternaria。依据柯赫氏法则证病试验,2株真菌均具有致病性,说明它们是辽宁碱蓬白腐病的致病菌。比较2株病原菌的生物学特性,UN-X2比UN-X1产孢量大、分生孢子萌发率高,菌落直径较大,耐旱、耐碱和耐酸性强。两株菌在相对湿度100%、28℃时达到最大产孢量。二者生长曲线相似,均在36h进入对数生长期、在96h达到最大值。2株病原菌最适氮源和最适生长因子相同,均为酵母膏和VB1,而最适碳源和无机盐不同,UN-X1为淀粉和FeSO4,而UN-X2为乳糖和MgSO4-7H2O。比较几种拮抗菌和化学药剂对2株病原菌的抑菌活性,草酸青霉和硫酸铜对UN-X1和UN-X2均具有较好的抑菌效果。2、辽宁碱蓬内生菌-草酸青霉和枯草芽孢杆菌抑菌效果及酶活性的检测：草酸青霉和枯草芽孢杆菌对供试细菌均无明显的抑菌效果。草酸青霉对链格孢属UN-X1和UN-X2的抑菌效果较好,抑菌率分别为86.9%和64.36%；枯草芽孢杆菌对大豆拟茎点白腐病菌抑菌效果明显,抑菌率达82.34%。草酸青霉使UN-X1和UN-X2的POD酶活性降低,而使PPO酶活性提高并处理与对照差异显著；枯草芽孢杆菌对大豆拟茎点种腐病菌的POD酶活性影响较大,使其酶活性明显降低,而对PPO酶活性影响不明显。3、草酸青霉致病性与枯草芽孢杆菌防病性：枯草芽孢杆菌浸提液能有效降低草酸青霉对玉米和番茄储物的侵染,玉米在温度10℃、RH65%和番茄在温度20℃、RH65%条件下,喷洒枯草芽孢杆菌浸提液能有效抑制草酸青霉对储物的侵染。枯草芽孢杆菌浸提液对草酸青霉3种酶活性产生不同程度的影响,可降低POD和PAL酶活性而提高PPO酶活性。4、辽宁碱蓬内生菌-草酸青霉和枯草芽孢杆菌对植物促生作用：以绿豆和玉米为试材,研究了2种碱蓬内生菌对植物种苗生长、生理营养指标及防御酶活性的影响。正交试验结果表明,草酸青霉对绿豆发芽率的影响因素为：温度>稀释倍数>浸泡时间；草酸青霉浸提液在25℃、稀释10倍、浸泡种子60min的条件下对绿豆的发芽率、种苗促生作用显著,其发芽率、根长、株高、单株叶面积、干重分别比对照提高10%、62.08%、63.9%、42.7%和29.7%；草酸青霉可提高绿豆种苗POD、PPO和CAT酶的活性。枯草芽孢杆菌对玉米发芽率的影响因素为：温度>稀释倍数>浸泡时间；稀释倍数为100的枯草芽孢杆菌浸提液在25℃条件下浸泡玉米种子30min,对玉米种苗促生作用明显。其发芽率、根长、株高、干重、叶面积比CK组依次提高了12.69%、71.92%、43.36%、23.8%和50.42%。枯草芽孢杆菌可提高玉米种苗的POD、PPO和CAT,酶活性。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-12
1 绪论  12-18
  1.1 碱蓬  12-14
    1.1.1 碱蓬的食用价值  12
    1.1.2 医药价值  12
    1.1.3 碱蓬的生态价值  12-13
    1.1.4 碱蓬耐盐基因的利用  13
    1.1.5 碱蓬内生菌的开发  13-14
  1.2 链格孢属真菌病害生物防治研究进展  14-16
    1.2.1 链格孢属菌的致病性  14
    1.2.2 微生物源制剂对链格孢属菌的抑制  14-15
    1.2.3 植物源生物制剂对链格孢属病菌的抑制  15-16
  1.3 植物内生菌  16-18
    1.3.1 枯草芽孢杆菌  16-17
    1.3.2 草酸青霉  17-18
2 辽宁碱蓬白腐病病原菌分离鉴定及生物学特性的研究  18-40
  2.1 实验材料  18-19
    2.1.1 主要仪器  18
    2.1.2 主要试剂  18-19
    2.1.3 供试菌种  19
    2.1.4 培养基  19
  2.2 实验方法  19-26
    2.2.1 辽宁碱蓬白斑病病原菌分离纯化  19
    2.2.2 辽宁碱蓬白斑病病原菌鉴定  19-21
    2.2.3 温度、湿度、pH值、光照,培养时间对病原菌菌丝生长和产孢量影响  21-22
    2.2.4 温度、湿度、pH值、光照对分生孢子萌发的影响  22-23
    2.2.5 病原菌最适培养基的筛选  23-24
    2.2.6 生长曲线的测定  24
    2.2.7 拮抗菌对病原菌的影响  24-25
    2.2.8 化学药剂对病原菌的毒力测定  25-26
  2.3 实验结果与分析  26-38
    2.3.1 辽宁碱蓬白腐病叶片病组织切片观察  26-27
    2.3.2 辽宁碱蓬白腐病病原菌鉴定  27-30
    2.3.3 温度、pH值、湿度、光照及培养时间对菌丝生长和产孢量的影响  30-33
    2.3.4 最适培养基的筛选  33-36
    2.3.5 生长曲线的测定  36
    2.3.6 拮抗菌对病原菌的影响  36-37
    2.3.7 化学药剂对2株病原菌的抑菌效果  37-38
  2.4 结论  38-39
  2.5 讨论  39-40
3 辽宁碱蓬内生草酸青霉和枯草芽孢杆菌抑菌效果的检测  40-49
  3.1 实验材料  40-41
    3.1.1 主要仪器  40
    3.1.2 主要试剂  40
    3.1.3 供试菌种  40-41
    3.1.4 培养基  41
  3.2 实验方法  41-43
    3.2.1 草酸青霉浸提液的制备  41
    3.2.2 枯草芽孢杆菌浸提液的制备  41
    3.2.3 细菌指示菌菌悬液的制备  41
    3.2.4 真菌指示菌菌悬液的制备  41-42
    3.2.5 抑菌圈试验  42
    3.2.6 对细菌和真菌的影响及抑菌率检测  42-43
    3.2.7 碱蓬内生草酸青霉抑菌成分化学属性的检测  43
    3.2.8 对指示菌PPO和POD酶活性的影响  43
  3.3 实验结果与分析  43-47
    3.3.1 抑菌效果  43-45
    3.3.2 碱蓬内生草酸青霉抑菌成分化学属性的检测  45
    3.3.3 对指示菌酶活性的影响  45-47
  3.4 结论  47
  3.5 讨论  47-49
    3.5.1 讨论拮抗菌对酶活性的影响  47-48
    3.5.2 草酸青霉抑菌机制  48-49
4. 草酸青霉致病性与枯草芽孢杆菌防病性的研究  49-57
  4.1 实验材料  49-50
    4.1.1 主要仪器  49
    4.1.2 主要试剂  49
    4.1.3 供试种子及果蔬  49
    4.1.4 供试菌种  49
    4.1.5 培养基  49-50
  4.2 实验方法  50-51
    4.2.1 草酸青霉菌悬液的制备  50
    4.2.2 枯草芽孢杆菌浸提液的制备  50
    4.2.3 草酸青霉与枯草芽孢杆菌混合培养液的制备  50
    4.2.4 枯草芽孢杆菌浸提液对草酸青霉生物量、产孢量、孢子萌发的影响  50
    4.2.5 枯草芽孢杆菌对草酸青霉酶活性的影响  50
    4.2.6 枯草芽孢杆菌影响草酸青霉导致储物霉变的检测  50-51
  4.3 结果与分析  51-56
    4.3.1 枯草芽孢杆菌对草酸青霉生物量、产孢量、孢子萌发的影响  51-52
    4.3.2 枯草芽孢杆菌对草酸青霉酶活性的影响  52
    4.3.3 枯草芽孢杆菌降低储物中草酸青霉霉菌总数的检测  52-56
  4.4 结论  56
  4.5 讨论  56-57
5 碱蓬内生菌对植物促生作用研究  57-69
  5.1 实验材料  57
    5.1.1 主要仪器  57
    5.1.2 主要试剂  57
    5.1.3 供试种子  57
    5.1.4 菌种  57
    5.1.5 培养基  57
  5.2 实验方法  57-59
    5.2.1 草酸青霉和枯草芽孢杆菌浸提液的制备  57-58
    5.2.2 种子萌发预试验与促生物质化学属性检测  58
    5.2.3 植株生长发育指标及其防御酶活性测定  58-59
  5.3 实验结果与分析  59-67
    5.3.1 草酸青霉和枯草芽孢杆菌促生组合的优化  59-62
    5.3.2 碱蓬内生草酸青霉和枯草芽孢杆菌浸提液对植株生长指标的影响  62-63
    5.3.3 草酸青霉和枯草芽孢杆菌浸提液对植物叶绿素和可溶性蛋白含量影响  63-65
    5.3.4 草酸青霉和枯草芽孢杆菌浸提液对植物种苗防御酶活性的影响  65-67
  5.4 结论  67
    5.4.1 草酸青霉对绿豆发芽率的影响  67
    5.4.2 枯草芽孢杆菌对玉米发芽率的影响  67
  5.5 讨论  67-69
    5.5.1 关于草酸青霉  67-68
    5.5.2 关于枯草芽孢杆菌  68-69
参考文献  69-76
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  76-77
致谢  77

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 植物病害及其防治 > 侵（传）染性病害
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