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脐血造血干细胞表面部分归巢受体功能缺陷和CD26活性阻断的初步研究

作　者: 张旭晗
导　师: 孙自敏
学　校: 安徽医科大学
专　业: 内科学
关键词: 脐血造血干细胞归巢缺陷 CD26
分类号: R457
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 23次
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内容摘要

目的验证脐血造血干细胞(haematopoietic stem cell,HSC)表面选择素配体功能基团的缺陷和脐血HSC表面CD26水解酶的活性;探讨岩藻糖基化工程和CD26水解酶活性阻断技术对脐血HSC的体外修复效应;初步研究岩藻糖基化工程和CD26水解酶活性阻断技术联合应用对脐血HSC早期植入的影响。方法收集健康足月产妇的新鲜脐血,利用免疫磁珠分选纯化出CD34+细胞,利用流式细胞术验证选择素配体功能基团的缺失,通过微板荧光分光光度计检测脐血HSC表面CD26的水解酶活性,同时检测骨髓和外周血作为对比。对脐血CD34+HSC分别进行岩藻糖基化工程和CD26水解酶活性阻断干预,通过流式细胞术和微板荧光分光光度计分别检测修复效果。设立实验分组(空白对照组、未处理CD34+细胞组、岩藻糖基化工程组、CD26酶活性阻断组、联合处理组),取新鲜分选的脐血CD34+HSC,按分组分别在体外进行岩藻糖基化,建立小鼠人脐血造血干细胞移植模型,动态观察人脐血HSC早期植入的情况。结果1. CD34+HSC表面CD26表达和酶活性:流式细胞术检测脐血、骨髓及外周血的CD34+HSC表面CD26的表达分别为:(7.62±0.63)%、(6.35±0.89)%和(6.18±0.91)%,三者之间相互比较(P>0.05)。其活性分别为:67.15U/1000个细胞(1U=1pmol/min)、26.85U/1000个细胞和20.95U/1000个细胞,脐血CD34+造血干/祖细胞表面CD26的水解酶活性明显高于其它两者(P<0.001)。2. CD34+HSC表面选择素配体功能基团的表达:流式细胞仪检测脐血、骨髓和外周血CD34+HSC表面P选择素配体功能集团的表达比例分别为:(83.46±6.33)%、(15.65±0.89)%和(80.17±6.85)%,三者之间相互比较(P>0.05);E选择素配体活性基团的表达为:(25.31±1.03)%、(26.34±0.89)%和(29.79±1.78)%,三者之间相互比较(P>0.05)。3.脐血CD34+HSC体外行岩藻糖基化工程后,E选择素配体活性基团表达比例由(25.31±1.03)%提高至(63.23±1.08)%。4.脐血CD34+HSC体外经岩藻糖基化处理和CD26阻断后移植至NOD/SCID造血干细胞移植模型,分析修复和干预技术对脐血干细胞归巢能力和早期植入的影响:动物实验初步结果示:联合处理组的早期植入效率最高,其次为CD26活性阻断组和岩藻糖基化工程组,未处理脐血CD34+HSC组最低,三者之间相互比较(P<0.05)。结论1.三种不同来源CD34+造血干/祖细胞表面的CD26分子表达无明显差别,但脐血HSC表面CD26的水解酶活性明显高于其它两组,外周血中的活性最低,表明脐血HSC存在归巢能力缺陷的生物学特征。2. P选择素配体活性基团在脐血及外周血CD34+造血干/祖细胞表面的表达无明显差别,但在骨髓干细胞表面表达偏低。体外经岩藻糖基化工程处理的脐血CD34+造血干/祖细胞可明显上调其表面E选择素配体活性基团的表达,证明了该技术的体外有效性。3.岩藻糖基化工程和CD26活性阻断技术分别可提高脐血HSC的归巢效率和早期植入率,联合处理后归巢和植入率提高的效果更加显著,初步验证了两种技术的体内有效性,为进一步研究打下基础。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
正文  10-43
  1.前言  10-14
  2.材料与方法  14-23
  3.结果  23-35
  4.讨论  35-37
  5.结论  37-38
  6.展望  38-39
  7.参考文献  39-43
附录  43-44
致谢  44-45
综述  45-52
  参考文献  50-52

脐血造血干细胞表面部分归巢受体功能缺陷和CD26活性阻断的初步研究

内容摘要

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