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制麦微生物污染对酵母絮凝的影响

作　者: 栾静
导　师: 赵长新
学　校: 大连工业大学
专　业: 发酵工程
关键词: 大麦水溶热稳定因子酵母絮凝微生物污染
分类号: TS261.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 5次
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内容摘要

大麦的微生物污染不但增加了制麦损失，使麦芽质量降低，而且对啤酒发酵产生了不良的影响。在啤酒生产过程中，酵母提前絮凝（Premature Yeast Flocculation, PYF）妨碍了啤酒发酵的正常进行，大麦微生物污染是促使酵母提前絮凝的主要因素。因此本文对酵母絮凝及其影响因素进行了研究。首先对酵母絮凝的检测方法进行优化，然后添加外源微生物制麦（将大麦表面的优势微生物定量加入浸麦水中），分析被微生物污染的大麦对酵母絮凝产生的影响，并探讨影响酵母絮凝的主要因素。对酵母絮凝的检测方法进行优化得到：酵母经250mmol/L EDTA溶液洗两次，无菌水洗两次，制成OD600在1.5~1.7的悬浮液，28℃，120r/min振荡1h；取3mL酵母悬浮液于比色皿中，上下倒置40次，测定30min~90min的自由细胞度。通过对澳大利亚Gairdner大麦表面微生物的分离，得到一株优势细菌和一株优势霉菌，其中细菌为革兰氏阴性菌经16S区序列分析鉴定为克雷白氏杆菌(AB118219.1)，霉菌经26S区序列分析鉴定为镰孢菌(AY633745.1)。将筛选得到的细菌和霉菌加入浸麦水中，进行制麦，提取微生物污染大麦的酵母提前絮凝因子（PYF factors），随着微生物侵染程度加剧PYF因子成分变复杂，66kDa分子质量的PYF因子含量增加，还新增了78kDa和32kDa分子质量的PYF因子；实验研究水溶热稳定因子对酵母絮凝的影响，得出大麦壳与细菌相互作用的水溶热稳定因子对酵母絮凝促进作用最显著，添加此水溶热稳定因子的酵母絮凝率较空白样提高了18.26%。采用Sephadex G-25分离大麦皮壳与细菌相互作用的水溶热稳定因子，得到S24组分对酵母絮凝影响最大，SDS-PAGE电泳图谱显示S24为单亚基蛋白，分子质量为66kDa，当浓度达2ppm时，酵母絮凝率提高了9.4%。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-11
第一章文献综述  11-23
  1.1 制麦微生物的污染  11-14
    1.1.1 大麦表面微生物  11-12
      1.1.1.1 田间大麦表面微生物  11
      1.1.1.2 贮藏大麦表面微生物  11-12
    1.1.2 制麦过程中大麦表面微生物的变化  12-13
    1.1.3 微生物污染对制麦的影响  13-14
    1.1.4 制麦微生物污染对成品麦芽质量的影响  14
  1.2 酵母菌絮凝  14-19
    1.2.1 酵母絮凝机理的研究进展  15-16
    1.2.2 酵母絮凝的测定方法  16-17
    1.2.3 酵母絮凝的影响因素  17-19
      1.2.3.1 基因因素  17-18
      1.2.3.2 生理因素  18
      1.2.3.3 环境因素  18-19
  1.3 大麦微生物污染对酵母絮凝的影响  19-22
    1.3.1 酵母的提前絮凝  19
    1.3.2 酵母提前絮凝因子  19-21
      1.3.2.1 抗菌多肽理论  19-21
      1.3.2.2 酸性多糖理论  21
    1.3.3 酵母提前絮凝过程  21-22
  1.4 实验的主要内容  22-23
第二章酵母絮凝方法的优化  23-29
  2.1 实验材料  23-24
    2.1.1 菌株  23
    2.1.2 培养基  23
    2.1.3 缓冲液  23
    2.1.4 实验试剂  23
    2.1.5 实验设备  23-24
  2.2 实验方法  24
    2.2.1 酵母培养方法  24
    2.2.2 絮凝测定方法  24
  2.3 结果与讨论  24-28
    2.3.1 酵母初始浓度对絮凝的影响  24-25
    2.3.2 温度对酵母絮凝的影响  25-26
    2.3.3 EDTA 洗涤次数和振荡培养时间对酵母絮凝的影响  26-27
    2.3.4 酵母絮凝测定方法的建立  27-28
  2.4 小结  28-29
第三章微生物的分离与鉴定  29-37
  3.1 实验材料  29-30
    3.1.1 原料  29
    3.1.2 培养基  29
    3.1.3 实验试剂  29-30
    3.1.4 实验设备  30
  3.2 实验方法  30-31
    3.2.1 大麦发芽工艺  30
    3.2.2 菌株分离方法  30
    3.2.3 优势菌的检测方法  30
    3.2.4 微生物的鉴定方法  30-31
      3.2.4.1 微生物形态学的鉴定方法  30
      3.2.4.2 革兰氏染色方法  30-31
      3.2.4.3 菌株的 26S 区域鉴定方法  31
      3.2.4.4 菌株的 16S 区域鉴定方法  31
  3.3 结果与讨论  31-36
    3.3.1 细菌分离结果  31-34
      3.3.1.1 细菌的初步鉴定  31-32
      3.3.1.2 16S 区域鉴定  32-34
    3.3.2 霉菌分离结果  34-36
      3.3.2.1 霉菌的形态学鉴定  34
      3.3.2.2 26S 区域鉴定  34-36
  3.4 小结  36-37
第四章微生物污染的大麦对酵母絮凝的影响  37-46
  4.1 实验材料  37-38
    4.1.1 菌株及原料  37
    4.1.2 培养基  37-38
    4.1.3 实验试剂  38
    4.1.4 实验设备  38
  4.2 实验方法  38-40
    4.2.1 大麦发芽工艺  38
    4.2.2 大麦的灭菌方法  38-39
    4.2.3 微生物侵染大麦的方法  39
    4.2.4 絮凝影响因子的提取方法  39
      4.2.4.1 PYF 因子提取方法  39
      4.2.4.2 影响酵母絮凝的水溶热稳定因子提取方法  39
    4.2.5 酵母絮凝测定方法  39-40
    4.2.6 SDS-PAGE  40
  4.3 结果与讨论  40-45
    4.3.1 PYF 因子的分析  40-41
    4.3.2 PYF 因子对酵母絮凝影响  41-42
    4.3.3 水溶热稳定因子的分析  42-43
      4.3.3.1 大麦壳的热稳定因子  42
      4.3.3.2 大麦壳与微生物相互作用的水溶热稳定因子  42-43
    4.3.4 水溶热稳定因子对酵母絮凝的影响  43-45
      4.3.4.1 菌体与大麦壳相互作用的水溶热稳定因子对酵母絮凝的影响  43-44
      4.3.4.2 探究影响酵母絮凝的水溶热稳定因子的来源  44-45
  4.4 小结  45-46
第五章絮凝因子的分离纯化及其对酵母絮凝的影响  46-51
  5.1 实验材料  46-47
    5.1.1 菌株及原料  46
    5.1.2 培养基  46
    5.1.3 实验试剂  46-47
    5.1.4 实验设备  47
  5.2 实验方法  47-48
    5.2.1 细菌的培养  47
    5.2.2 水溶热稳定蛋白的提取方法  47
    5.2.3 酵母絮凝测定方法  47
    5.2.4 蛋白分离纯化方法  47-48
    5.2.5 酵母絮凝影响因子的浓缩方法  48
    5.2.6 SDS-PAGE  48
  5.3 结果与分析  48-50
    5.3.1 葡聚糖凝胶层析分离纯化促进酵母絮凝的因子  48-49
    5.3.2 SDS-PAGE  49-50
  5.4 小结  50-51
结论  51-52
参考文献  52-56
硕士期间参与的科研项目及成果  56-57
致谢  57

制麦微生物污染对酵母絮凝的影响

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